Efecto de la infección con virus Junín sobre la expresión y el transporte núcleo-citoplasmático de la ribonucleoproteína heterogéneo-nuclear A1

KNOTT ME; MAETO C; LINERO F; GARCIA CC; PAULA ELLENBERG; LUIS A. SCOLARO; CASTILLA, V

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Las ribonucleoproteínas heterogéneo-nucleares del grupo A/B (hnRNPs A/B) normalmente intervienen en el procesamiento, transporte y traducción de ARN mensajeros y su transporte núcleo-citoplasmático está relacionado con la regulación de la supervivencia celular. En trabajos previos se comprobó que las hnRNP A/B participarían en la replicación del virus Junín (JUNV), agente causal de la fiebre hemorrágica argentina, habiéndose demostrado que el silenciamiento de estas proteínas inhibe la replicación viral. El objetivo de este trabajo consistió en analizar las características de la expresión de las hnRNPs del grupo A/B en cultivos celulares de distinto origen infectados con JUNV o transfectados con vectores que permiten la expresión transitoria de proteínas virales. Mediante la técnica de western blot se analizó la expresión de proteínas hnRNPs A/B en células Vero, BHK-21 y HeLa infectadas con JUNV en forma aguda o células Vero persistentemente infectadas con JUNV (células V3). La infección aguda en Vero, BHK-21 y HeLa no provocó cambios en los niveles de expresión de las hnRNPs A/B. En células V3, durante la primera etapa de la persistencia los niveles de hnRNPs A/B no se modificaron pero en una etapa tardía, en la cual no se detecta producción de virus, se observó una marcada reducción en los niveles de estas proteínas. Mediante ensayos de inmunofluorescencia indirecta, se analizó el efecto de la infección viral o de la expresión de proteínas virales sobre la localización intracelular de hnRNP A1 en células transfectadas con el plásmido T7-hnRNP A1 que permite la expresión de esta proteína. Se determinó que mientras la infección en células Vero promueve la acumulación de hnRNP A1 en el citoplasma, la infección en células BHK-21, HeLa o V3 no altera la localización predominantemente nuclear de la misma.  La sobreinfección con JUNV de células V3 no modificó el patrón de distribución nuclear de hnRNP A1. Asimismo, la sobreexpresión de hnRNP A1 no provocó alteraciones en la  producción de virus infeccioso por parte de estos cultivos. Finalmente, se observó que la sobreexpresión conjunta de hnRNP A1 y la proteína viral N indujo la relocalización de hnRNP A1 al citoplasma en células Vero pero no en células V3. Sin embargo, la co-expresión de hnRNP A1 con las proteínas virales GPC o Z no alteró su localización predominantemente nuclear. Conclusiones Mientras que la infección aguda en diversos sistemas celulares no alteró los niveles de expresión de las hnRNPs A/B, dichos niveles se encontraron marcadamente disminuidos durante la persistencia viral en células Vero.  En aquellos sistemas en los cuales el virus no produce efecto citopático (células BHK-21, HeLa y V3) la localización de hnRNP A1 fue principalmente nuclear. Sin embargo, la infección aguda o la sobreexpresión de la proteína viral N en células Vero  indujo la relocalización de hnRNP A1 al citoplasma. Esto sugiere la participación de la proteína de nucleocápside  viral en la alteración del patrón de distribución de hnRNP A1 que podría estar relacionada con una modulación del efecto citopático de JUNV.