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Título:

Producción de tricotecenos macrocíclicos por el epibionte fúngico de Baccharis coridifolia y evaluación de la actividad antiviral contra el virus Junín

Autor/es:

ROSSO LUCIANA; C. C. GARCÍA; MD BERTONI; E. B. DAMONTE; M MAIER

Lugar:

Córdoba, Argentina

Reunión:

Congreso; III Congreso Latinoamericano de Micotoxicología; 2000

Resumen:

PRODUCCION DE TRICOTECENOS MACROCICLICOS POR EL EPIBIONTE FUNGICO DE BACCHARIS CORIDIFOLIA Y EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIVIRAL CONTRA EL VIRUS JUNIN Rosso, M.L.1, Maier, M.S.2, Bertoni, M.D.1, García, C.C.3 y Damonte, E.B.3 1Depto. de Ciencias Biológicas, 2Depto. de Química Orgánica, 3Depto. de Química Biológica, Fac. de Cs. Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Ciudad Universitaria, Pabellón 2, (1428) Buenos Aires, Argentina OBJETIVOS Realizar cultivos para la producción de tricotecenos macrocíclicos. Aislar y caracterizar estas toxinas y evaluar la actividad antiviral de los tricotecenos puros contra el virus Junin , responsable de la fiebre hemorrágica argentina. MATERIALES Y MÉTODOS Cultivo de meristemas y aislamiento de tricotecenos macrocíclicos Para el aislamiento del epibionte fúngico, los meristemas se cultivan en ágar-agua 2% y se incuban 30 días a temperatura ambiente. El micelio que emerge del meristema se repica en tubos con extracto de malta agarizado. Las cepas del epibionte se cultivan en erlenmeyers con un medio de glucosa (15,6 g/l) y melaza de maíz (10 ml/l) y se incuban 30 días a temperatura ambiente. Luego se transfieren 5 ml del medio a erlenmeyers con 35 ml de extracto de papa. Los cultivos se incuban 30 días a temperarura ambiente, se filtran y se extraen con acetato de etilo. El micelio se remoja en metanol, se filtra y el extracto metanólico se concentra y se extrae con acetato de etilo. Ambos extractos se purifican utilizando distintas técnicas cromatográficas. Evaluación de la actividad antiviral de los tricotecenos macrocíclicos Se determina mediante un ensayo de inhibición del rendimiento viral del Virus Junin (VJ), cepa IV4454, en células Vero a las 24 hs. de infección, a fin de establecer la concentración inhibitoria 50% (CI50). Así mismo, se mide la citotoxicidad de los compuestos por el método del MTT, luego de 2 días de incubación en presencia de las toxinas, determinando así la concentración citotóxica 50% (CC50). RESULTADOS El análisis por cromatografía en capa delgada del extracto de acetato de etilo del epibionte fúngico de Baccharis coridifolia y su comparación con un testigo productor de tricotecenos macrocíclicos (Myrothecium verrucaria) evidenció la presencia de estas toxinas. Las estructuras de estos compuestos fueron determinadas por RMN 1H y de 13C y asignadas como verrucarina A, verrucarina J, roridina A y roridina E, los cuales mostraron valores efectivos de CI50 contra VJ, siendo estas concentraciones menores a las CC50 de cada uno. CONCLUSIONES El epibionte fúngico de B. coridifolia produce tricotecenos macrocíclicos: Verrucarinas A y J y Roridinas A y E. Estos tricotecenos son los mismos que los hallados en las plantas de B. coridifolia. Los 4 compuestos ensayados mostraron efecto inhibitorio contra el virus Junin, siendo la Verrucarina J el más efectivo con una CI50 < 1,25 ng/ml y una CC50 de 8,3 ng/ml.

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