Mecanismo de acción virucida del disulfuro NSC20625 contra los arenavirus

C. C. GARCÍA; NÉLIDA A. CANDURRA; E. B. DAMONTE

Buenos Aires

Congreso; VII Congreso argentino de virología; 2002

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES-AR;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Muchas de las proteínas con motivos Zn-finger de numerosos virus animales, cumplen un papel importante en los procesos de transcripción y replicación del genoma y en la encapsidación de la partícula viral. La conservación que estas secuencias muestran entre las distintas cepas de un mismo virus, las han tornado un blanco potencial en la quimioterapia antiviral. Así se han reportado numerosos estudios con diversos agentes químicos que inhiben la replicación del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) actuando sobre el motivo Zn-finger de la proteína de la nucleocápside p7, con eyección del Zn y pérdida de la estructura nativa de la proteína.  En este trabajo se utilizó uno de estos compuestos activos como una herramienta para estudiar la funcionalidad biológica, en el ciclo de replicación viral, de la proteína Z (11KDa) de los arenavirus Junín (JUNV) y Tacaribe (TCRV), que contiene un dominio RING finger del tipo Cys3HysCys4, altamente conservado en esta familia y además considerar la probable utilidad terapéutica de este compuesto contra la fiebre hemorrágica argentina, causada por JUNV. Para ello se analizaron las condiciones del efecto inactivante del disulfuro NSC20625, provisto por el National Cancer Institute (USA), sobre JUNV y TCRV ensayado por contacto directo de los viriones con distintas concentraciones del compuesto y a distintos tiempos. Los resultados mostraron que el NSC20625 es un buen agente virucida actuando a los pocos minutos de estar en contacto con el virus, con valores de CI50 (concentración inactivante 50%) obtenidos de 0.7-1.3 µM para JUNV y TCRV, respectivamente. Para definir a qué nivel se bloquea el ciclo de multiplicación viral en la infección de células Vero con los viriones inactivados, se analizaron las diferentes etapas del mismo. Ni en la adsorción, ni en la penetración se detectaron diferencias en las células infectadas con viriones inactivados por NSC20625 respecto de los viriones infectivos, lo que sugirió que la funcionalidad biológica de las glicoproteínas virales no estaba afectada por el agente inactivante. Esto se confirmó midiendo la capacidad inmunogénica de los virus inactivados por inoculación de ratones adultos con 3 dosis de 104 UFP/dosis de JUNV y TCRV inactivados con NSC20625 y sin inactivar. Se detectaron títulos similares de anticuerpos neutralizantes en todos los grupos de animales inoculados, indicando la capacidad de las glicoproteínas de los viriones inactivados para inducir la respuesta de anticuerpos. Se estudió luego la capacidad de los viriones inactivados de realizar los procesos de transcripción y replicación del genoma viral en células Vero. Para ello se realizaron una reacción de RT-PCR, utilizando primers específicos para la amplificación del extremo 3´ del ARN viral, 5´ del mARN de N y de la forma antigenómica del ARN viral y una reacción de RT-nested PCR empleando primers específicos para la amplificación del extremo 5´ del ARN viral, mARN de GPC  y el extremo 3´ de la forma antigenómica del ARN viral. Se comprobó la ausencia del RNA correspondiente a los genes N y GPC en células Vero, lo que implica que tanto la replicación como la transcripción están bloqueados en la infección con JUNV y TCRV inactivados por NSC20625. Además se comprobó que no hay síntesis de proteínas virales en células infectadas con virus inactivado. Por lo tanto, los viriones inactivados mantienen la funcionalidad de las proteínas externas, lo que les permite entrar a la célula pero no pueden efectuar la biosíntesis de macromoléculas virales.