La proteína Z como blanco de acción para el tratamiento de las fiebres hemorrágicas

CYBELE C. GARCÍA; MAHMOUD DJAVANI,; IVAN TOPISIROVIC; KATHERINE L.B. BORDEN; MARÍA S. SALVATO; ELSA B. DAMONTE

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005

Asociación Argentina de Microbiología

Los miembros de la familia Arenaviridae, que incluye patógenos humanos causantes de severas fiebres hemorrágicas, son virus envueltos cuyo genoma expresa sólo 5 proteínas, entre ellas una pequeña proteína llamada Z de 11 kDa. Z posee un particular motivo Zn finger (RING) altamente conservado entre los distintos arenavirus, haciendo de esta proteína un blanco potencial en la quimioterapia antiviral. Las proteínas que portan dominios RING finger han sido localizadas tanto en núcleo como en citoplasma y probablemente, a través de esa secuencia participan en interacciones proteína-proteína. La correcta coordinación de Zn entre los residuos de cisteína e histidina que presenta este motivo, es necesaria para esta interacción. Estudios recientes mostraron que la proteína Z de LCMV interactúa con varias proteínas celulares con motivos RING, entre ellas, la proteína de leucemia promielocítica (PML), y la proteína de homeodominios ricos en prolina (PHR). En trabajos anteriores, hemos demostrado que compuestos reactivos con motivos Zn finger, provistos por el National Cancer Institute (USA), son inhibidores de los arenavirus Junín, Tacaribe y LCMV, y estarían dirigidos particularmente hacia la proteína Z de estos arenavirus, desestabilizando su estructura y provocando su multimerización. Con el fin de corroborar si Z es el blanco de acción de estos compuestos, en el presente trabajo, se analizó por dicroísmo circular el efecto de 3 de los mismos (el derivado azoico ADA,  y los disulfuros NSC20625 y aldrithiol-2) directamente sobre la proteína recombinante purificada Z de LCMV. Asimismo, se estudió por microscopía confocal, el efecto del tratamiento de células infectadas con NSC20625, sobre las interacciones entre Z y las proteínas celulares PML y PRH. Los resultados de la espectroscopía dicroica circular muestran que el tratamiento de Z con estos compuestos, en un radio de 1:1, afecta el correcto plegamiento de la misma, observándose un efecto similar al que se obtiene cuando Z es tratada con el quelante EDTA. El efecto es inclusive más evidente cuando el tratamiento se realiza con concentraciones mayores, desestabilizándose completamente la estructura de la misma. Por otro lado, a través de ensayos de inmunofluorescencia analizados por microscopía confocal, se observó que la distribución en núcleo y citoplasma de las proteínas celulares PML y PRH está alterada en las células infectadas con LCMV. Luego del tratamiento de células infectadas con NSC20625, durante 72 h, hay una reversión en la localización de estas proteínas al patrón observado en células sin infectar. Por lo tanto, puede concluirse que el compuesto inhibe las interacciones de la proteína Z con PML y PRH. Estos resultados son un indicio más para confirmar que Z es el blanco de acción de los compuestos reactivos con motivos Zn finger, y dan futuras perspectivas para el uso de los mismos como agentes quimioterapeúticos contra las fiebres hemorrágicas.