CARACTERIZACIÓN DE PARTÍCULAS DE VIRUS JUNÍN INACTIVADAS POR COMPUESTOS REACTIVOS CON MOTIVOS ZINC FINGERS

CYBELE C. GARCÍA; NÉLIDA A. CANDURRA; E. DAMONTE

Vaquerías, Córdoba, Argentina

Congreso; XXV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2006

Sociedad Argentina de Virología

Los arenavirus son agentes causales de severas fiebres hemorrágicas en humanos. En nuestro país, el arenavirus Junín (JUNV) es el responsable de la fiebre hemorrágica argentina, enfermedad que afecta potencialmente a una población de 5 millones de personas en una de las zonas agrícola-ganaderas más importante de nuestro país. Al presente, esta enfermedad endémica aún es huérfana de una quimioterapia antiviral. En trabajos anteriores, nuestro grupo ha demostrado la importancia de la proteína Z de los arenavirus como blanco de acción antiviral. Hemos observado que compuestos reactivos con motivos zinc fingers interactúan con la proteína Z, desestabilizando su estructura, provocando su multimerización e inactivando así la partícula viral. Con el fin de caracterizar estas partículas virales inactivadas y evidenciar cuál es la etapa del ciclo de replicación bloqueada en estos viriones, se realizó un análisis morfológico por microscopía electrónica de partículas virales purificadas y tratadas luego con el compuesto disulfuro aromático NSC20625, así como ensayos de inmunoprecipitación de estas partículas purificadas con suero policlonal específico contra JUNV. De los preparados observados al microscopio electrónico puede concluirse que las partículas virales de JUNV inactivadas presentan las glicoproteínas de superficie aparentemente intactas, sin embargo por debajo de las mismas se observa una zona muy electrodensa distinguible respecto de las partículas sin tratar. Por otro lado, luego de los ensayos de inmunoprecipitación, las proteínas virales fueron analizadas en geles de poliacrilamida y se pudieron observar las bandas correspondientes a las proteínas N y G1, tanto en las partículas inactivadas como en las partículas que no recibieron tratamiento, sin embargo no se visualizó por este método la proteína Z. Para confirmar la reactividad de estos compuestos con la proteína Z de JUNV, se corrieron en geles de poliacrilamida en condiciones reductoras y no reductoras, muestras de suspensiones virales purificadas marcadas radioactivamente e inactivadas, donde se observó la desaparición de la banda correspondiente a la proteína Z en las muestras procesadas sin el agregado de agentes reductores. Por resultados anteriores, sabíamos que las partículas inactivadas con NSC20625 pueden llevar a cabo las etapas de adsorción e internalización. Por ensayos de PCR en tiempo real se comprobó aquí que no son capaces de realizar los procesos de replicación y transcripción viral, por lo que la etapa de desnudamiento es la que podría estar inhibida. Para esclarecer este punto, se realizó un ensayo de penetración de la nucleocápside en el citoplasma celular. A través del seguimiento de las proteínas virales marcadas se comprobó que las nucleocápsides de los viriones inactivados quedan retenidas en los endosomas. En conclusión, el mecanismo de inactivación parecería involucrar cambios en la estructura de la proteína de matriz Z que resultan como consecuencia en modificaciones irreversibles en la estructura del virión luego de la reacción con el compuesto. Esta alteración provocaría la imposibilidad de llevar a cabo el desnudamiento viral para liberar las nucleocápsides virales en el citoplasma celular, quedando demostrada entonces la importancia de la proteína Z en esta etapa temprana del ciclo de replicación de los arenavirus.