ESTUDIO DE LA REGULACIÓN DEL TRASNPORTE DE AGUA Y EL pflt INTRACELULAR EN CÉLULAS DE TÚBULO COLECTOR CORTICAL.

CAPURRO CLAUDIA; RIVAROLA VALERIA; FORD PAULA; CHARA OSVALDO; PARISI MARIO

Tafí del Valle, Tucumán, Argentina

Congreso; Reunión Anual de la SAB; 2001

Sociedad Argentina de Biofísica

Los túbulos colectores del riñon de mamífero juegan un papel central en la regulación del transporte de agua-solutos y en el mantenimiento del equilibrio ácidobase del organismo. Esta heterogeneidad funcional se corresponde con una heterogeneidad estructural de modo que» en el túbulo colector existen dos tipos de células mayoritarias. Las células principales (PC) son las encargadas de la reabsorción de Na+ y agua, bajo la acción de la hormona arginina-vasopresina (AVP). En lo que respecta al transporte de agua, las células principales expresan tres tipos de canales específicos para agua (acuaporinas): AQP2, AQP3 y AQP4 siendo la AQP2 la única regulada por la AVP. En cuanto a las células intercalares (IC) existen al menos dos tipos (a y b ) ambas responsables del mantenimiento, del equilibrio ácidobase. Debido a la complejidad del estudio de la regulación del transporte de agua e iones en los túbulos enteros, la posibilidad de contar con un sistema celular en cultivo provee una herramienta muy importante para los estudios fisiológicos. El objetivo central de este trabajo fue , clarificar, desde un punto de vista funcional y molecular, los mecanismos involucrados en el transporte de agua y en el mantenimiento del equilibrio ácidobase y su regulación, utilizando como modelo una nueva línea celular de túbulo colector cortical (RCCD1). Los estudios de medición de flujo neto de agua muestran que existe un "componente absorptivo de agua" acoplado a una reabsorción de Na+ y Cl- y regulado por AVP y un "componente secretor de agua" asociado a una Secreción de Cl y HCO3-. Estos movimientos de agua ocurren aún en ausencia de las AQPs hasta el presente descritas en, los túbulos colectores nativos, lo que plantea la hipótesis de un co-transporte agua-soluto. Actualmente se postula que los mecanismos que intervienen en la secreción de fluido estarían vinculados con la regulación del volumen celular. La disminución del volumen celular, debida a una secreción de agua o, por exposición a un gradiente osmóticos, conduciría a una activación de diversas proteínas transportadoras (Na+-H+ y Cl- - HCO3-) relacionadas con la regulación del pH intracelülar (pH|) y posiblemente del transporte de agua, pero su vinculación y los mecanismos implicados en ésta adaptación no han sido aún propuestos. Nuestros estudios de medición de pH¡ muestran que éstas células poseen una alta capacidad de regular espontáneamente el pHj luego de una Carga acida. Demostramos que en presencia de un medio hipertónico se produce una alcalinización que podría deberse a un flujo de salida de agua el cuál conduciría a un achicamiento celular y a la activación primaria del transportador Na+-H+. Por otra parte, la AVP (10-8 M) induce un aumento inmediato y significativo del pHi sensible al amiloride. Los experimentos de RT-PCR y Western-blot muestran que las células RCCDi expresan las isoformas NHE1 y NHE2 transportador Na+-H+. La presencia de más de una isoforma nos condujo al planteo de un posible rol diferencial en la regulación del pHi y del volumen celular. El paso siguiente fue caracterizar la participación del intercambiador Cl- - HCO3- en la regulación del pHi y del movimiento de agua en la línea RCCDi. Los estudios funcionales y moleculares muestran la presencia de la isoforma AE2 del transportador posiblemente involucrado en la secreción de agua en las células RCCDi. La expresión de los intercambiadores Na+-H+ y Cl- - HCO3- en las células RCCD1 nos conducen a estudiar su intervención en la regulación del volumen celular en respuesta a gradientes osmóticos tanto en células nativas como en aquellas transfretadas con AQPs.