La utilización del polímero polihidroxialcanoato (PHA) incrementa la supervivencia y la resistencia a estrés oxidativo en fase estacionaria de una mutante rpoS de Pseudomonas putida

LAURA J. RAIGER- IUSTMAN; PETER DÖHMER PISANI; BEATRIZ MENDEZ; JIMENA A. RUIZ

Buenos Aires

Congreso; • IV Reunión anual de la Sociedad Argentina de Microbiología General; 2007

SAMIGE

En bacterias Gram negativas existen diversos mecanismos de control activos que les permiten hacer frente a condiciones adversas. Uno de ellos es la Respuesta General a Estrés, que se induce en condiciones tales como la escasez en nutrientes, el estrés osmótico y el estrés oxidativo. Los genes involucrados en la resistencia al estrés se encuentran bajo el control de una subunidad sigma alternativa de la RNA polimerasa denominada sS, codificada por el gen rpoS. El nivel intracelular de sS aumenta marcadamente durante la fase estacionaria de crecimiento. Se ha demostrado que las mutantes rpoS presentan una menor supervivencia en fase estacionaria y menor resistencia al estrés. Los polihidroxialcanoatos (PHAs) son polímeros de reserva bacterianos cuya acumulación y degradación favorece la supervivencia de los microorganismos en el ambiente. Diversos trabajos demostraron que la utilización de PHA incrementa la resistencia al estrés de distintas especies bacterianas, tanto en ambientes naturales como en cultivos de laboratorio. Teniendo en cuenta estos aspectos, el objetivo general del presente trabajo fue estudiar el efecto de la utilización de PHA en la supervivencia y la resistencia al estrés oxidativo durante la fase estacionaria de una mutante rpoS de Pseudomonas putida. Para esto se realizaron cultivos de P. putida KT2440 (cepa salvaje) y de su correspondiente mutante rpoS en medio mínimo suplementado con una fuente de carbono que puede ser utilizada para la síntesis de PHA y otra que no puede ser utilizada. Los resultados obtenidos mostraron que la mutante rpoS cultivada en condiciones de acumulación de PHA,  presentaba un marcado incremento en la supervivencia y en la resistencia al estrés oxidativo en fase estacionaria, en comparación con los cultivos crecidos en condiciones de no acumulación. En cambio, la cepa salvaje no mostró diferencias en la supervivencia en fase estacionaria en las dos condiciones de cultivo y apenas se observó una leve diferencia en la resistencia al estrés oxidativo. Asimismo,  la cinética de degradación de PHA en condiciones de acumulación del polímero resultó diferente para las dos cepas. Mientras que la cepa KT2440 degradaba el 34% del PHA acumulado luego de 24 hs de incubación, la cepa mutante rpoS degradó el 72% del PHA luego de ese período. Estos resultados estarían indicando que en la mutante rpoS la degradación de PHA se induce tempranamente y que la utilización del polímero suprime el fenotipo de menor supervivencia y resistencia al estrés de la mutante rpoS.