Caracterización de una nueva proteína beta I "like" en Rhodovulum sulfidophilum

LAURA J. RAIGER-IUSTMAN; NORMA L. PUCHEU; NORMA L. KERBER; AUGUSTO F. GARCIA

Mendoza- Argentina

Congreso; “XXXV Reunión anual de la Sociedad Argentina en investigación en Bioquímica y; 1999

El aparato fotosintético de las bacterias púrpuras no sulfurosas posee un centro de reacción y dos complejos antenas: LH1 y LH2, que difieren tanto en proteínas como en espectro de absorción de luz. El complejo LH1 rodea al centro de reacción (CR) y está compuesto por 2 proteínas integrales de membrana: LH1a  y LH1b. Tanto el CR como estos péptidos están codificados por el operón puf.El complejo LH2 esta compuesto por otras dos proteínas LH2a  y LH2b codificadas por el operón puc. Nosotros hemos estudiado la fotomorfogénesis en una bacteria de este grupo: Rhodovulum sulfidophilum, que como características particulares tiene el ser marina y no regular su aparato fotosintético por tensión de oxigeno o intensidad de luz.Estudiando las modificaciones postraduccionales que se dan en las proteínas del complejo antena de Rhv. sulfidophilum vimos que existe una fosforilación en un péptido que comigra con las proteínas beta y que el aminoácido fosforilado seria una proteína beta.Este péptido difiere significativamente de las otras proteínas del complejo antena, tanto de Rhv. sulfidophylum como de otras bacterias fotosintéticas, ya que al estar fosforilado no es extraíble en solventes orgánicos (metanol: cloroformo: acetato de amonio)., mientras que la fracción no fosforilada sí era soluble en esos solventes.A través de una columna de interacción hidrofóbica (LH60) hemos purificado los péptidos beta no fosforilados, y con  la fracción de membrana no extraída realizamos una columna de afinidad Cobre-Sepharosa de la cual obtuvimos el péptido fosforilado. De la secuenciación de los péptidos provenientes de la LH60 vimos que lo que nosotros llamábamos "región de las Betas" estaba compuesta por tres péptidos diferentes: beta 2, y dos proteínas beta 1 "like". De estas proteínas beta 1 "like" la que aparecía en mayor proporción, que según su perfil electroforético correspondería a la de menor peso molecular, posee las características conservadas de la mayoría de las proteínas beta 1 y concuerda con la secuencia del producto del gen puf B, recientemente publicada por Masura S. et.al (J. Biol Chem. 1999. 274:10795-10801).La otra de las beta 1 "like" es altamente homologa a la anterior pero difiere en la aparición de un aminoácido modificado en la posición 12 lo que haría suponer la existencia de otro gen que codifica para esta proteína y que no se corresponde con el clonado por Masura et al. Esta proteína seria la que sufre la modificación por fosforilación