INVESTIGADORES
RAIGER IUSTMAN Laura Judith
congresos y reuniones científicas
Título:
Obtención de una cepa biocontroladora marcada con la proteína verde fluorescente (GFP) y su seguimiento en microcosmos
Autor/es:
MARÍA MARTA CAFFARO; LAURA J. RAIGER-IUSTMAN; NORMA L KERBER; NORMA L PUCHEU; AUGUSTO F. GARCIA
Lugar:
La plata, Buenos Aires
Reunión:
Congreso; II Reunion anual de la Sociedad Argentina de Microbiología General; 2005
Institución organizadora:
SAMIGE
Resumen:
En nuestro laboratorio hemos aislado una cepa del género Bacillus, el B. amyloliquefaciens BNM122 con propiedades fungicidas probadas frente a Sclerotinia sclerotiorum, Fusarium solana, Fusarium oxysporum y Rhizoctonia solana.
El hecho de introducir un organismo en el ambiente, aunque no esté genéticamente modificado, requiere de estudios que permitan analizar el impacto del mismo sobre la comunidad microbiana presente en el medio en el que debe actuar. El antibiótico producido por la cepa biocontroladora, además de actuar contra el fitopatógeno, también podría alterar la población microbiana con la cual deberá interactuar.
Para poder seguir el comportamiento de B. amyloliquefaciens BNM122 introdujimos en dicha cepa el plásmido pBSVG101 que codifica para la proteína verde fluorescente (gentileza del Dr. M. Itaya del Mitsubishi Kasei Institute of Life Science, Tokio, Japón)
El plásmido fue tratado con BamHI metilasa y luego introducido en la cepa BNM122 por electroporación con un pulso de 2.5 Kv y 200 Ω. La cepa receptora fue plaqueada, luego de su recuperación en medio LB suplementado con 5μg/ml de tetraciclina. Finalmente se seleccionó una colonia (BNM122-Cl8) que emitía una clara fluorescencia verde al ser observada directamente con el transiluminador UV.
Una vez obtenida la cepa de B. amyloliquefaciens BNM122-Cl8 se realizó un ensayo dual frente a las especies de hongos previamente mencionadas para comprobar que se mantenía intacta su capacidad antifúngica.
Para analizar la posibilidad de seguir esta cepa en futuros ensayos en microcosmos, se inoculó un microcosmo compuesto por 1g de tierra sin esterilizar, tamizada y llevada a humedad a 70% de capacidad de campo con 1x105 UFC de la cepa BNM122-Cl8 y se la incubó a 28 ºC durante 16 hs. Luego de ese tiempo se observó una alícuota de dicho microcosmos al microscopio de fluorescencia pudiéndose ver la cepa en cuestión en forma clara y libre de interferencias con respecto a las otras bacterias presentes en la muestra y los demás componentes del suelo.
Además se analizó la persistencia del vector pBSVG101 en la cepa BNM122-Cl8 en ausencia de antibiótico durante 50 generaciones.
