Transducción de señales mediadas por la isoforma atípica de proteína quinasa C (PKC ZETA) expresada en una línea de linfoma T murino.

BARREIRO ARCOS ML , SILBERMAN, DM, GORELIK G, KLECHA A, GENARO, AM, CREMASCHI, G

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas- XLIX Reunión Anual de la SAIC; 2004

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

 La isoforma atípica PKC zeta ha sido ampliamente involucrada en la regulación de varias funciones celulares que abarcan tanto fenómenos de proliferación como de muerte celular. Previamente demostramos una incrementada expresión de esta isoforma en linfocitos T tumorales BW5147 relacionada con su alta tasa proliferativa y con una elevada actividad de óxido nítrico sintasa (NOS). También comprobamos una disminución de la expresión genómica y proteica de la isoforma inducible de la NOS (iNOS) en células BW arrestadas. El objetivo de este trabajo fue profundizar los mecanismos intracelulares implicados en estos efectos. Para ello analizamos la acción de distintos bloqueantes de los caminos enzimáticos en los que participa la PKC zeta sobre la actividad proliferativa (evaluada por incorporación de timidina tritiada) y la actividad de NOS (medida por formación de 14C citrulina). Ambas actividades fueron inhibidas por la wortmanina, inhibidor de la PI3 quinasa y por la sulfasalazina, inhibidor de la IkappaB quinasa (p<0.05, n=4). Por ensayos de EMSA se evaluó la traslocación nuclear del NF-kappaB (NF-kB), en extractos nucleares de células BW tratadas en ausencia o presencia de staurosporina, inhibidor de PKC, comprobándose que el mismo disminuyó la activación de NF-kB. Tanto la staurosporina como la introducción intracelular de un Ac anti-PKC zeta inhibieron la proliferación celular (% de inhib/Stau: 81.3±7.9%, de inhibi/Ac: 50±4.9) y la expresión genómica y proteica de iNOS evaluados por ensayos de RT-PCR y western-blot respectivamente. Estos resultados indicarían que la PKC zeta en las células de linforma T BW, está relacionada con un aumento de la actividad y expresión de la iNOS, probablemente a  través de la activación de NF-kB, y que este mecanismo estaría implicado en la regulación de la activdad proliferativa celular.