EXPRESIÓN DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES EN LARVAS DE RACHIPLUSIA NU

LOPEZ M. GABRIELA; MOLINARI M. PAULA; PERALTA ANDREA; CHIMENO SILVINA; TABOGA OSCAR

Tandil, prov. de Buenos Aires

Jornada; XXIII Reuni¨®n Anual de la Sociedad Argentina de Virolog¨ªa; 2003

Sociedad Argentina de Virolog¨ªa

La necesidad de contar con grandes cantidades de prote¨ªnas virales de inter¨¦s en el diagn¨®stico del virus de la fiebre aftosa (VFA), rotavirus (BRV) y el virus de la diarrea viral bovina (BVDV) hace limitante la expresi¨®n en sistemas in vitro, tanto por costo como por practicidad. El objetivo de este trabajo es obtener altos niveles de expresi¨®n de ant¨ªgenos recombiantes in vivo a bajo costo, utilizando baculovirus como vectores. Para ello se infectaron larvas de lepid¨®pero con distintos baculovirus recombinantes: AcVP6, AcP1 y Acp80 (baculovirus que expresan prote¨ªnas antig¨¦nicas de BRV, VFA y BVDV respectivamente). Estas construcciones se basan en el reemplazo del gen de la poliedrina por la secuencia de inter¨¦s y por lo tanto son fenot¨ªpicamente poliedrina (-). En particular se evalu¨® la cin¨¦tica de expresi¨®n de las prote¨ªnas antig¨¦nicas en larvas de Rachiplusia nu. Se infectaron 8 larvas por in¨®culo mediante  inyecci¨®n dorsal en el cuarto segmento abdominal. Se extrajeron prote¨ªnas totales y de los cuerpos grasos a los 2, 3, 4 y 5 d¨ªas post infecci¨®n (dpi) y se evalu¨® la expresi¨®n de las prote¨ªnas de inter¨¦s por Western blot.  Los mayores niveles de prote¨ªna registrados fueron a los 5 dpi y en mayor proporci¨®n en los cuerpos grasos. De todas las prote¨ªnas recombinantes se obtuvieron altos niveles de expresi¨®n, no menos de entre 50 y 100 ¦Ìg  por larva. Una cantidad equivalente es producida por aproximadamente 30 botellas T25 de c¨¦lulas de insecto o 5x107 c¨¦lulas en suspensi¨®n. El costo de producci¨®n en el sistema de c¨¦lulas de insecto es aproximadamente 100 veces mayor que en larvas de lepid¨®ptero. Por lo tanto, se concluye que el sistema de expresi¨®n en larvas constituye una alternativa atractiva para la producci¨®n a gran escala de prote¨ªnas de inter¨¦s.