CARACTERIZACIÓN POR MUTAGENESIS INSERCIONAL DE LA PROTEÍNA VP6 DE ROTAVIRUS. SU POSIBLE USO COMO CARRIER PARA EPITOPES HETERÓLOGOS

PERALTA ANDREA; LOPEZ MARÍA GABRIELA; TABOGA OSCAR

Vaquerías, Prov de Córdoba

Jornada; XXIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2003

Sociedad Argentina de Virología

El objetivo general de este trabajo es el estudio de la proteína VP6 de rotavirus mediante mutagénesis insercional, analizando su capacidad de oligomerizar en trímeros, su multimerización, sus propiedades antigénicas, su interacción con la proteína VP2 y los niveles de expresión. La proteína VP6 representa entre el 50% al 60% de la masa total del virión. Esta compuesta por 422 aminoácidos. Es altamente inmunogénica y antigénica. Cuando esta proteína se expresa en sistemas heterólogos, adopta espontáneamente una conformación en trímeros, que luego se ensamblan formando estructuras multiméricas complejas. En este trabajo se seleccionaron cinco sitios de inserción en la proteína VP6, que corresponden a las posiciones aminoacídicas 14, 101, 146, 235 y 382. A través de mutagénesis dirigida por PCR se insertó un sitio XbaI en la secuencia de VP6 que permitió el clonado posterior de un epitope foráneo (V5, de 14 aa), originando así las distintas versiones VP614, VP6101, VP6146, VP6235, y VP6382. Las proteínas quiméricas VP6-V5 fueron expresadas en el sistema baculovirus-células de insecto y se obtuvieron altos niveles de expresión para todas las versiones ensayadas. La construcción VP6235 es la única versión que no es capaz de formar trímeros, pero aún así, puede atravesar un colchón de sacarosa 30%, indicando que es capaz de formar multimeros. La versión VP6382 no forma multímeros a pesar de poder formar trímeros. Estos resultados están en concordancia con los obtenidos por otros grupos al caracterizar VP6 por mapeo de deleción. Todas las versiones que multimerizan son capaces de interactuar con la proteína VP2. La versión VP614  no es reconocida por distintos sueros policlonales anti-VP6, mientras que sí lo es por un monoclonal anti-V5, indicando que mediante la inserción de un epitope en esta posición, se interrumpe el sitio antigénico inmunodominante de la proteína VP6. Las versiones restantes son reconocidas por los sueros policlonales anti-VP6 y por el monoclonal anti-V5.