VP2 DE ROTAVIRUS COMO CARRIER PARTICULADO DE ANTIGENOS HETEROLOGOS

MOLINARI PAULA; PERALTA ANDREA; LOPEZ MARÍA GABRIELA; TABOGA OSCAR

Vaquerías, Prov de Córdoba

Jornada; XXIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2004

Sociedad Argentina de Virología

Las partículas de rotavirus son grandes y complejas con cápsides que constan de tres capas concéntricas. Cuando la proteína de la capa más interna VP2 es expresada en células de insecto, se ensambla en partículas tipo core o CLPs, compuestas de unas 120 copias. Se ha comprobado que la región N-terminal de VP2 no es necasaria para su multimerización ni interacción con las otras proteínas virales para originar partículas tipo virus o VLPs y que la deleción de los primeros 92 aminoácidos resulta en la formación de partículas pseudo-core (D92CLPs). Con el objetivo de desarrollar vacunas recombinantes, se han utilizado diferentes VLPs o CLPs derivadas de virus animales o vegetales. La principal razón de intentar obtener partículas quiméricas se basa en la notoriamente baja inmunidad de los péptidos en general. Para aumentar la inmunogenicidad de este tipo de moléculas, las regiones genómicas correspondientes a epitopes neutralizantes con probada capacidad protectora fueron expresadas como proteínas de fusión capaces de formar VLPs.   El objetivo del presente trabajo fue fusionar dos antígenos distintos a DVP2: VP1, la proteína más inmunogénica del virus de la fiebre aftosa (VFA) y ESAT6 de Mycobacterium tuberculosis. Para la construcción de los baculovirus recombinantes se utilizó una metodologia basada en la transposición sitio especifica del casette de interés desde un plásmido donor a un bácmido que contiene el genoma de baculovirus en E. coli. Posteriormente, por transfección de células de insecto Sf9 mediada por lípidos catiónicos con los bácmidos recombinantes se obtuvieron los baculovirus AcCLP-ESAT y AcCLP-VP1. Se comprobó la expresión de las proteinas recombinantes en las células Sf9 por Western-blot utilizando sueros policlonales anti ESAT6, anti VFA y anti-rotavirus y se ensayó su cinética de expresión. Los resultados mostraron una adecuada expresión de todas las proteinas recombinantes en el sistema. Como paso previo a la formacion de CLPs, se evaluó la extracción de las proteinas recombinates con distintos  detergentes y su capacidad de formar dimeros.