OPTIMIZACION DE LA EXPRESIÓN DE PROTEINAS DE INTERES VETERINARIO EN LARVAS DE LEPIDOPTERO INFECTADAS POR VIA ORAL

LOPEZ MARÍA GABRIELA; MOLINARI PAULA; PERALTA ANDREA; TABOGA OSCAR

Vaquerías, Prov de Córdoba

Jornada; XXIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2004

Sociedad Argentina de Virología

   Debido al elevado costo de producción a gran escala de proteínas recombinantes en células de insecto, la infección de larvas de lepidóptero aparece como una alternativa explotable. Dadas la impracticidad de la inyección intracuticular y la muy baja infectividad per os de los baculovirus recombinantes de fenotipo oclusión negativo (occ-), nuestro objetivo fue determinar la estrategia óptima de producción de inóculo para la infección oral de larvas. En la primera estrategia, el gen de interés se clonó río abajo del promotor de poliedrina y el gen de poliedrina bajo el promotor de p10, dos promotores tardíos del baculovirus AcNPV. Los baculovirus recombinantes generados (Ac3AB1pol) son de fenotipo occ+ y producen poliedros que contienen poblaciones homogénes de virus recombinantes. La segunda estategia propone co-ocluir virus recombinantes occ- (Ac3AB1) con virus helper salvajes (AcNPV). Como proteína de interés se empleó la proteína no estructural 3AB1 del Virus de la Fiebre Aftosa (VFA), con la que es posible diferenciar animales vacunados de infectados mediante serología. Se comparó la expresión relativa de la proteína 3AB1 a partir de ambos baculovirus. Los resultados mostraron una clara depresión de la expresión de 3AB1 (alrededor del 30%) en las células infectadas con el baculovirus occ+, atribuible a la coexistencia del ARNm de poliedrina y de 3AB1 en una proporción cercana a 1 y compitiendo por la maquinaria traduccional de la célula infectada.Por otro lado, la proporción de coinfección de células con Ac3AB1 y AcNPV que rindió los poliedros con la mejor relación Ac3AB1/AcNPV (1:4) por PCR cuantitativa fue de 10:1, rindiendo pocos poliedros. Así, una solución de compromiso entre ambas estrategias resultó en coinfecciones entre Ac3AB1 y Ac3AB1pol en lugar de AcNPV, para aumentar la proporción de 3AB1 a que ha de expresarse en las larvas. Finalmente, se infectaron oralmente con estos poliedros larvas de Rachiplusia nu y con sus extractos fue posible diferenciar animales vacunados de infectados con VFA.