Expresión de la nucleoproteína y hemoglutinina del virus del sarampión en células de insecto

BELIZAN ALEJANDRA; SOBREVALS LUCIANO; ARGUELLES MARCELO; PERALTA ANDREA; ROTA R; RABINOVITZ B; TABOGA OSCAR; GLIKMAN GRACIELA

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005

Sociedad Argentina de Virología

EL virus del sarampión (MV) es un patógeno ubicuo perteneciente a la familia Paramixoviridae y aunque actualmente está desapareciendo en los países desarrollados debido a eficientes programas de vacunación, todavía es muy común en países en vías de desarrollo. La infección por MV es una de las mayores causas de morbilidad y mortalidad en la infancia a escala global, fundamentalmente porque en el curso de la misma se produce una inmunosupresión transitoria. La nucleoproteína y la hemoaglutinina son las proteína de mayor importancia diagnóstica: a)la nucleoproteína (N) es la proteína más inmunogénica y los anticuerpos anti-N representan un marcador inequívoco de seropositividad; b) la hemoaglutinina (H) es una glicoproteína qeu induce anticuerpos neutralizantes de la infección, además de estar involucrada en la interacción con el receptor celular CD46. Para la optimización de los métodos de diagnóstico serológico, es necesario obtener proteínas N y H en un sistema en el cual dichas proteínas posean un plegamiento similar al nativo. EL sistema de baculovirus recombinantes es ampliamente utilizado para la expresión de proteína heterólogas en cultivo de células de insecto, debido a que ne la mayoría de los casos, las proteínas recombinates son procesadas, modificadas y dirigidas a sus loacalizaciones celulares apropiadas. Tanto el gen de la proteína N como el de la proteína H fueron amplificados mediante RT-PCR utilizando primers específicos para cada gen, y clonados en el plásmido donor pFastBac. Este plásmido se empleó para transformar células competentes DH10Bac, para la obtención de bácmidos recombinantes, los cuales se utilizaron para transfectar celúlas Sf9. Luego se seleccionaron los clone spositivos y se evaluó el nivel de expresión de cada uno mediante Western blot y ELISA. Conclusión: El sistema basado en baculovirus permitió obtener niveles apropiados de expresión de las proteínas virales. Utilizando anticuerpos policlonales obtenidos por inmunización con la partícula viral completa, en un ensayo de ELISA de captura se pudieron detectar las proteínas recombinantes. Por otro lado, dichas proteínas fueron detectadas por sueros de pacientes en etapa convalesciente y por suero de individuos vacunados. Estos resultados sugieren que los epitopes de reconocimiento son similares a los de las proteínas nativas.