Optimización de la expresión de proteínas de interés veterinario en larvas de lepidoptero infectadas por vía oral

LOPEZ MARÍA GABRIELA; MOLINARI PAULA; PERALTA ANDREA; TABOGA OSCAR

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005

Sociedad Argentina de Virología

L aproducción de proteínas en el sistema baculovirus-células de insecto se enfrenta a menudo con el elevado costo de producción a gran escala. La expresión de proteínas recombinantes en larvas de lepidóptero aparece entonces como una interesante alternativa. El objetivo del presente trabajo fue determinar la estrategia óptima de producción de inóculo para la infección oral de larvas, debido a la impracticidad de la inyección intracuticulat y la muy baja infectividad per os de los baculovirus recombinantes de fenotipo oclusión negativo (occ-). Se ensayaron dos estrategias diferentes. La primera propone coocluir virus recombinantes occ- (Ac3AB1) con virus helper salvajes (AcNPV). En la segunda el gen de interés se clonó río abajo del promotor de poliedrina y el gen de poliedrina bajo el promotor de p10, dos promotores tardíos del baculovirus AcNPV. Los baculovirus recombinantes generados (Ac3AB1pol), fenotípicamente occ+, producen poliedros conteniendo poblaciones homogéneas de virus recombinante. Como proteína de interés se empleó la proteína 3AB1 de FMDV con la que es posible diferenciar animales vacunados de animales infectados mediante serología. Conclusión: cuando se compararon ambas estrategias, los resultados mostraron una clara depresión de la expresión de 3AB1 (alreddedor de 30%) en las células infectadas con el baculovirus occ+, atribuible a la coexistencia del ARNm de poliedrinay de 3AB1 en una proporción cercana a 1 y compitiendo por la maquinaria traduccional de la célula infectada. Por otro lado, la proporción de coinfección de células con Ac3AB1 y AcNPV que rindió los poliedros con la mejor relación Ac3AB1/AcNPV (1:4) por PCR cuantitativa fue de 10:1 pero la misma rindió un bajo número de polideros. Se concluyó entonces que los mejores resultados se obtienen por coinfecciones entre 3AB1 y Ac3Ab1pol en lugar de ACNPV, aumentado la proporción de 3AB1 a expresarse en larvas. Finalmente, cuando se emplearon extractos de larvas de Rachiplusia nu infectadas oralmente con estos poliedros, fue posible diferenciar animales vacunados de infectados.