La proteína VP2 de rotavirus como carrier particulado de antígenos heterólogos

MOLINARI PAULA; PERALTA ANDREA; LOPEZ MARÍA GABRIELA; TABOGA OSCAR

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005

Sociedad Argentina de Virología

Las partículas de rotavirus son grandes y complejas con cápsides que constan de tres capas concéntricas. Cuando la proteína de la capa más interna VP2 es expresada en células de insecto, se ensambla en partículas tipo core o CLPs. Si además se expresa VP6, ambas interactúan formando VLPs (virus like particle).  Se ha comprobado que la región N-terminal de VP2 no es necasaria para su multimerización ni interacción con las otras proteínas virales y que la deleción de los primeros 92 aminoácidos resulta en la formación de partículas pseudo-core (D92CLPs). Con el objetivo de desarrollar vacunas recombinantes, se han utilizado diferentes VLPs o CLPs derivadas de virus animales o vegetales. La principal razón de intentar obtener partículas quiméricas se basa en la notoriamente baja inmunidad de los péptidos en general. Para aumentar la inmunogenicidad de este tipo de moléculas, las regiones genómicas correspondientes a epitopes neutralizantes con probada capacidad protectora fueron expresadas como proteínas de fusión capaces de formar VLPs.   El objetivo del presente trabajo fue fusionar el antígenos ESAT6 de Mycobacterium tuberculosis a DVP2r y comprobar que mantiene la capacidad de interactuar con VP6r ensamblándose en partículas semejantes al virus (VPLs). Para la construcción de los baculovirus recombinantes se utilizó una metodología basada en la transposición sitio especifica del casette de interés desde un plásmido donor a un bácmido que contiene el genoma de baculovirus en E. coli. Posteriormente, por transfección de células de insecto Sf9 mediada por lípidos catiónicos con los bácmidos recombinantes se obtuvieron los baculovirus AcESATDVP2r y AcVP6r. Se comprobó la expresión de las proteínas recombinantes en las células Sf9 por Western-blot utilizando sueros policlonales anti ESAT6 y anti-rotavirus. Los resultados mostraron una adecuada expresión las proteínas recombinantes en el sistema. Se evaluó la capacidad  de VP6r y ESAT6DVP2r de interactuar y formar VLPs  en células SF9. En base a los resultados obtenidos concluimos que ESAT6DVP2r se expresó adecuadamente en el sistema de células de insecto y que VP2 permitió la incorporación del antígeno Esat6 en su extremo N-terminal sin alterar su interacción con VP6, permitiendo la formación de VLPs.