EXPRESIÓN DE LA PROTEÍNA ESTRUCTURAL DE CÁPSIDE VP6 DE ROTAVIRUS HUMANO A EN EL SISTEMA BACULOVIRUS-CÉLULAS DE INSECTO

RAIBENBERG FERNANDO; PEREZ OSCAR; JURADO ROSANA; PERALTA ANDREA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología 2015; 2015

Sociedad Argentina de Virología

Los rotavirus humanos grupo A (RV HA) son la causa más común degastroenteritis aguda en niños menores de 5 años. Se estima que más de 450.000niños mueren por esta enfermedad cada año a nivel mundial. Las infecciones por RV HA continúan generando costos directossignificativos para los sistemas de salud. El uso de pruebas diagnosticascomerciales de origen importado constituye una carga económica considerablepara estos sistemas en países en desarrollo. El ensayo ELISA es la metodología de uso principal en el diagnóstico de RVHA. El Servicio de VacunaAntirrábica del INPB ANLIS Malbrán desarrolló un ensayo diagnóstico ELISA parala detección de rotavirus A en heces, de producción nacional que permitiría mejorar el acceso, a esta tecnología diagnóstica. Con el fin de optimizar ycomplementar la elaboración de los componentes del ensayo ELISA, se propuso la producción local de la proteína estructural de cápside VP6de RV HA para su aplicación como antígeno control positivodel mencionado diagnóstico. Para expresar la proteína estructural de cápside VP6 humana A se empleoel sistema de expresión baculovirus-células de insecto. La secuencia completadel segmento 6 de RV HAque codifica para la proteína VP6 seaisló por RT-PCR y se subclonó en el vector donante pFastBac?1 del sistemaBac-to-Bac. Este sistema proveyó una manera rápida y sencilla para lageneración de baculovirus Autographa californica multiple nuclearpolyhedrosis virus (AcMNPV) recombinantes AcVP6RVHA. La proteína VP6recombinante se expresó en altos niveles en células de insecto en cultivo. Elanálisis por SDS-PAGE confirmó que posee un peso molecular de ~ 44 kD y quepresenta la misma movilidad que la proteína VP6 de rotavirus de simio SA11 dereferencia. La inmunodetección por westernblot con un anticuerpo policlonal anti RV HA y la evaluación mediante el ensayoELISA, para la detección de antígeno de rotavirus A en heces, corroboraron quela VP6 humana A recombinante producida en el presente estudio conserva sucapacidad antigénica. Adicionalmentese realizó un estudio complementario para evaluar la posibilidad de producirpartículas similares a virus, VLPs 2/6 quiméricas cuyo resultado demostró quecuando ambas proteínas estructurales de cápside de rotavirus son coexpresadas através de la co infección de células Sf9con los baculovirus recombinantes AcVP2SA11 y AcVP6RVHA,la proteína VP2 SA11 de simio es capaz de interactuar con la proteína VP6humana A formando VLPs 2/6 quiméricas de doble capa que se autoensamblanintracelularmente y que pueden ser purificadas a partir de sobrenadantes decultivos de células Sf9 co infectados. Este trabajo demuestraque producir localmente la proteínaestructural de cápside VP6 de rotavirus humano A, a partir deaislamientos de Argentina usando el sistema de expresión baculovirus-células deinsecto es factible.