Diseño de VLPs quiméricas como moléculas multiméricas presentadoras de epitopes heterólogos

PERALTA ANDREA; MOLINARI PAULA; TABOGA OSCAR

Mérida, Yucatán, México

Congreso; VI Congreso Nacional de Virología; 2009

Sociedad Mexicana de Bioquimica

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Las partículas semejantes a virus (VLPs) están formadas por proteínas de origen viral capaces de autoensamblarse y formar estructuras particuladas al ser expresadas en sistemas heterólogos. Las VLPs son consideradas un sistema seguro de presentación de antígenos heterólogos, ya que carecen de genoma viral, no replican y no son infecciosas. La proteína VP6 de rotavirus, es capaz de autoensamblarse y formar VLPs. En base a los datos cristalográficos de la proteína VP6, se seleccionaron como sitios blancos de inserción de secuencias heterólogas, las posiciones aminoacídica 171-172, 311-312 y 301/308. A través de mutagénesis dirigida por PCR se insertó un sitio de reconocimiento para la enzima de restricción XbaI en la secuencia de VP6 que permitió el clonado posterior de un epitope de 14 aminoácidos derivado del paramixovirus SV5, originando así las versiones VP6171-V5, VP6311-V5 y VP6301/8-V5. Estas quimeras fueron expresadas en el sistema baculovirus-células de insecto y se determinaron los niveles de expresión alcanzados, su capacidad de trimerización y multimerización, su interacción con la proteína VP2 y su inmunogenicidad en animales de laboratorio. La caracterización estructural de estas quimeras, mediante gradientes de CsCl, microscopía electrónica y ensayos de ELISA sandwich reveló que la inserción del epitope V5 en la posición 171 de VP6 produce VLPs quiméricas estables y que exponen el epitope heterólogo en su superficie. La inmunización de ratones por vía i.p. con la VLP quimérica VP6171-V5 +VP2 resultó en la inducción de una sólida respuesta humoral contra el epitope V5 aún utilizando sólo 300ng de antígeno, mientras que la inmunización con 5ug de la misma quimera pero en su estado monomérico indujo una respuesta humoral contra el epitope V5 apenas detectable, demostrando la ventaja de utilizar un carrier multimérico.