Identificación molecular de virus ORF en lesiones vesiculares de cuatro ovinos de la provincia de Río Negro

ANDREA PERALTA; GABRIELA CALAMANTE; CARLOS ROBLES; GUIDO KONIG

Buenos Aires

Jornada; XXXIII Reunión Científica Anual de la SAV; 2013

Sociedad Argentina de Virología

El Ectima Contagioso (EC) es una enfermedad zoonótica viral causada por el virus Orf (ORFV), de amplia distribución mundial que afecta principalmente a ovinos y caprinos. ORFV es un virus epiteliotrópico que genera lesiones en labios, nostrilas, mucosas orales y ubres de ovejas y cabras. Las lesiones en estas áreas son dolorosas y pueden producir anorexia e inanición, que producen menor rendimiento corporal en animales adultos y pueden conducir a la muerte a los corderos jóvenes. El diagnóstico de la infección se brinda a través de la observación del cuadro clínico, aislamiento viral a partir de las escaras y observación mediante microscopía electrónica. Sin embargo, el único método confiable y aceptado mundialmente es la detección del ADN viral mediante la amplificación de secuencias específicas utilizando la técnica de PCR. La prevención de la enfermedad se realiza mediante vacunación con cepas atenuadas y es especialmente importante que las cepas utilizadas en las vacunas estén relacionadas con las circulantes. En nuestro país se comercializa una vacuna viva atenuada por pasajes en cultivos celulares de riñón de borrego, obtenida a partir de una cepa uruguaya. Sin embargo, teniendo en cuenta que en nuestro país no se realizó la identificación ni la caracterización de las cepas circulantes en los rodeos ovinos, se desconoce la relación filogenética entre la cepa vacunal utilizada y las cepas presentes en el campo,  situación epidemiológica riesgosa para el estado sanitario de los planteles ovinos. El objetivo general de este trabajo es la identificación y caracterización molecular del virus Orf causante del EC en ovinos y caprinos en Argentina. A partir de 4 ovejas con cuadro clínico de EC, pertenecientes a un establecimiento de cría extensiva en la zona cercana a Bariloche, se tomaron muestras de las lesiones y se conservaron refrigeradas hasta su llegada al laboratorio. Se analizaron distintos procedimientos para la extracción del ADN así como distintas condiciones para una reacción de amplificación por PCR basada en la detección de una región del gen ORF045, secuencia altamente conservada entre todas las cepas depositadas en el Gene Bank. Se amplificaron fragmentos del tamaño esperado y sus identidades se confirmaron por secuenciación. Luego, en las mismas muestras se analizaron mediante amplificación por PCR  los genes E2L y VIR que presentan variabilidad y permiten realizar un análisis filogenético de las cepas. Se obtuvieron amplicones de los tamaños esperados y se realizó la secuenciación de los mismos. Las secuencias obtenidas fueron comparadas entre sí y con cepas brasileras, únicas de Sudamérica depositadas en el Gene Bank. En este trabajo se implementaron las condiciones para el diagnóstico molecular de EC mediante amplificación por PCR y se confirmó molecularmente la presencia de ORFV en los 4 ovinos con cuadro clínico de EC. En el futuro, se continuará la  caracterización molecular de las cepas vacunales y circulantes en nuestro país.