Expresión de la glicoproteína G del virus rábico y su utilización con fines de diagnóstico

RUSSO SUSANA; PERALTA ANDREA

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argentina de Virología

El personal de salud que maneja virus rábico debe vacunarse para estar protegido y los niveles de anticuerpos alcanzados se evalúan mediante ensayos de seroneutralización y posterior detección de progenie viral por inmunofluorescencia. Esta técnica requiere la manipulación del virus y depende de la destreza del operador. Existen ELISAs comerciales que utilizan la glicoproteína G como antígeno, pero estos kits son caros, de vida media corta y la importación suele ser complicada. El objetivo de este trabajo fue expresar la glicoproteína G del virus rábico (cepa CVS) en el sistema baculovirus-célula de insecto y su evaluación como antígeno en un ELISA con fines de diagnóstico. Con este fin se construyeron dos baculovirus recombinantes, uno que expresa la glicoproteína G en su forma nativa (Ac-RG) y el otro (Ac-Gt) que expresa una forma truncada carente de la región transmembrana y fusionada a los péptidos His y V5 para facilitar su purificación y detección. Las dos construcciones se expresaron correctamente en células de insecto SF9 infectadas con estos baculovirus (evaluado mediante ensayos de western blot) pero la versión Gt perdía el tag de His (no así el tag V5) lo que imposibilitaba su posterior purificación por IMAC. Debido a esto, se continuó trabajando sólo con la versión RG. Para verificar la correcta localización en membrana y su funcionalidad, se transfectaron células Sf9 con el vector pIB-RG y a los 3 días post-transfección, las células comenzaron a fusionarse, no así los controles correspondientes, demostrando la funcionalidad de la proteína RG expresada. Como se mencionó anteriormente, extractos celulares de Sf9 infectadas con Ac-RG fueron analizados mediante ensayos de western blot y la proteína fue reconocida por distintos sueros de animales vacunados (perros, gatos y caballo). Con estos extractos, se procedió a poner a punto un ELISA, evaluando cantidad de antígeno en placa, diluciones de sueros problemas y dilución de los distintos conjugados anti-especie a utilizar. Los resultados obtenidos indicaron que la proteína expresada en este sistema puede ser utilizada como antígeno en un ELISA con el fin de detectar anticuerpos contra el virus rábico en animales vacunados. En este momento, se están ajustando y optimizando las condiciones para trabajar con sueros de humanos vacunados.