Optimización del ensayo cometa para la evaluación del daño inducido por agentes alquilantes.

A. GÜERCI, D. M, LIVIAC Y R MARCOS.

Cartagena de Indias. Colombia

Congreso; Congreso latinoamericano de Mutagénesis, Carcinogénesis y Teratogénesis.; 2007

ALAMCTA (Asociación Latinoamericana de Mutagénesis Carcinogénesis y Teratogénesis Ambiental)

Si bien el fundamento del ensayo cometa se sustenta en la capacidad de detección de rupturas en la molécula de ADN, muchos agentes mutagénicos no inducen directamente este tipo de daño. Desde esta perspectiva, la información propuesta sobre la genotoxicidad de un compuesto sería limitada. No obstante, la introducción de pasos adicionales permite optimizar la técnica para la detección de otra clase de lesiones. Si bien las rupturas pueden responder al daño directo de distintos agentes, también constituyen instancias intermedias en la acción de mecanismos de reparación. En tal sentido fue evaluada la habilidad de la cytosina arabinosa (ara-c) y la hydroxyurea (HU) (inhibidores de la reparación del ADN) para detectar el daño producido por agentes alquilantes tales como Etil Metano Sulfonato (EMS) y Metil Metano Sulfonato (MMS). En cuanto a la metodología, se utilizaron las diferentes categorías de sistemas celulares utilizados en la técnica (monocapa, suspensión y sangre periférica humana). Cultivos de las líneas MRC-5 y TK6 como de sangre periférica fueron incubados durante 30 minutos con diferentes concentraciones de las sustancias evaluadas en presencia y ausencia de ara-C (1.8 mM) y HU (10 mM). El ensayo se implementó en su versión alcalina y se analizaron 200 células por punto experimental. Cada imagen celular fue capturada empleando el programa Komet 5.5. El análisis del daño se abordó utilizando el Olive Tail Moment  (OTM). Los datos fueron tratados mediante el test t-Student. Los resultados evidencian la utilidad de esta prueba para detectar daño de bases en las líneas mencionadas. Al respecto,  diferencias significativas (p< 0.001) se observaron comparando los tratamientos alquilantes con y sin inhibidores. El resultado negativo en sangre periférica podría estar indicando que los distintos sistemas celulares pueden diferir en la vía de entrada de los compuestos, siendo  y que los efectos pueden depender de la línea en cuestión.