Utilización del ciliado Tetrahymena thermophila como modelo de expresión de proteínas con anclaje glicosilfosfatidilinositol (GPI), el caso de GP60 de Criptosporidium parvum.

EUGENIA ELGUERO; MARIELA L. TOMAZIC; MONTES, GUADALUPE; B.C. NUDEL; LEONHARD SCHNITTGER; ALEJANDRO D. NUSBLAT

CABA

Congreso; XXVII Reunión Anual; 2015

Sociedad Argentina de Protozoologia

Cryptosporidium parvum es un protozoo parásito  del phylum Apicomplexa causante lacriptosporidiosis, enfermedad que genera  diarreas en terneros neonatos y es responsable de la mortalidad de animales en nuestro país e importantes pérdidas económicas en la actividad ganadera. Uno de los principales determinantes de los diferentes subtipos de Criptosporidium es la proteína de superficie GP60. Esta proteína  al igual que la mayoría de las proteínas de superficie del phylum se encuentran unidas a la membrana por un anclaje de tipo glicofosfatidilinositol (GPI) y con frecuencia están implicadas en el procesos de reconocimiento, adhesión y/e invasión a las células hospedadoras.  Estas características tornan a las proteínas GPI escenciales para la superviviencia de los protozoos y ejercen un fuerte efecto inmunomodulador en el organismo hospedador, lo que las convierte en candidatos vacunales de gran valor biotecnológico. En este trabajo se realizó la expresión heteróloga del antígeno GP60 de C. parvum en el ciliado Tetrahymena thermophila, el cual ha demostrado ser capaz de expresar, plegar y procesar correctamente otras proteínas del tipo GPI provenientes de diferentes protozoos parásitos.  Para llevarlo a cabo se utilizó la estrategia de transformación en cepas conjugantes de T. thermophila, utilizando vectores episomales de ADN ribosómico de la proteína GP60 bajo el promotor de MTT1 inducible por Cadmio. Se evaluó mediante western blot con anticuerpos específicos la presencia de GP60, y se observó que T. thermophila es capaz de procesar esta proteína en una variante de 40KDa. Esta variante se mantuvo incluso luego del enriquecimiento en fracción GPI indicando que éste ciliado no solo es capaz de expresar sino también de realizar las modificaciones post-traduccionales necesarias para la obtención del antígeno GP60 proveniente de C. parvum.