ESTUDIO DE LA DINAMICA EVOLUTIVA DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C (HCV) EN LA INFECCION CRONICA POR MAS DE UN GENOTIPO VIRAL

CULASSO A; GARCÍA G; BARÉ P; CAMPOS R

Valle Hermoso, Córdoba, Argentina

Congreso; XXVI Reunión científica anual de la sociedad argentina de virología; 2006

SAV

Antecedentes: El HCV es un virus de ARN de cadena positiva que replica en hepatocitos y en menor medida en células mononucleares periféricas (CMP) y otros tejidos. Se ha demostrado que, en cultivos prolongados de CMP derivados de pacientes con infección crónica y sin estimulación exógena, el HCV persiste mas allá de los 30 días de iniciados los cultivos. Algunos incluso derivaron en líneas celulares linfoblastoideas B productoras de HCV. El análisis de la diversidad de los genotipos obtenidos en cultivo podría aportar nueva información sobre los mecanismos evolutivos relacionados a los diversos reservorios del HCV en la infección crónica con más genotipo. Objetivos: Estudiar la evolución del HCV en distintos compartimentos biológicos durante la infección crónica mixta contemplando tratamientos con ribavirina + peg-interferón a. Materiales y métodos: Obtención, mediante centrifugación en gradiente FICOLL, de células sanguíneas mononucleares a partir de sangre periférica de un paciente infectado con HCV. Cultivo primario de los CMP recuperados. Extracción de ácido ribonucleico (ARN) viral utilizando paquetes comerciales (TRIzol, columnas QIAGEN) a partir del plasma de los pacientes y de los sobrenadantes (SN) de sus cultivos recolectados entre 5 y 45 días de iniciados (sumando un promedio de 28 determinaciones por cultivo). Detección de ARN viral mediante transcripción reversa seguida de reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) anidada con cebadores dirigidos a la región 5’ no transcripta del genoma viral. Genotipificación a través de RFLP. Resultados: Se analizaron 3 pares de plasmas-cultivos (PC) contenidos de un paciente en 3 oportunidades: PC1, PC2 y PC3. Siendo PC2 obtenido durante el tratamiento. En PC1 se detectó genotipo 2 en plasma y en los tiempos iniciales de su cultivo. También fue posible detectar HCV genotipo en tiempos posteriores. El análisis del plasma de PC2 resultó negativo para HCV. En cambio, en su cultivo, se pudo obtener HCV de genotipo 1. PC3, obtenido 2 años después del tratamiento, mostró en el plasma HCV de genotipo 2. Los tiempos de cultivo estudiados hasta la fecha (21 días) muestran también este genotipo. Al presente no se detectó genotipo 1 en este cultivo. Conclusión: En un paciente con infección crónica de HCV genotipo 2, utilizando la metodología de cultivo de CMP, se pudo detectar la presencia adicional de HCV de genotipo 1. Se puede inferir la existencia de una infección mixta con una clara prevalencia del genotipo 2. El análisis de PC2 indica el éxito del tratamiento en la disminución de la carga viral del genotipo 2 en plasma y cultivo. La detección posterior en cultivo del genotipo 1 es compatible con la reconocida mayor resistencia del mismo a la terapia mencionada. Sin embargo el genotipo 2 detectado en plasma y cultivo de PC3 señala: a. –una falla del tratamiento en erradicarlo por completo y b.- una posible ventaja replicativa del mismo sobre el genotipo 1. La aparente desaparición del genotipo 1 de este cultivo resta aún por confirmarse. Los Resultados obtenidos demuestran la importancia de desenmascarar infecciones mixtas inaparentes con relación al tratamiento. Los análisis filogenéticos de las diversas poblaciones virales permitirán establecer origen y evolución de ambos genotipos en la infección mixta.