Estudio del efecto recíproco entre los virus HIV y HCV en cultivos de células mononucleares periféricas

BASTON MARIELA; PARODI CECILIA; ALOISI NATALIA; CORAGLIA ANA; BELMONTE LILIANA; BRACCO MARÍA MARTA; RUIBAL ARES BEATRIZ; BARÉ PATRICIA

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología 2008; 2008

Sociedad Argentina de Virología- Asociación Argentina de Microbiología

Las interacciones virales en los pacientes coinfectados con el virus de la hepatitis C (HCV) y el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) han sido observadas, de manera indirecta, a través del impacto clínico que una infección ejerce sobre la otra. A pesar de que el estudio de los efectos de un virus sobre el otro es objeto de gran interés, la ausencia de sistemas in vitro impide estudiar si tales efectos observados son directos o indirectos. Con el propósito de analizar si la infección previa por HIV puede ejercer algún efecto sobre la posterior infección de HCV y viceversa, se utilizó un sistema de cultivo de células mononucleares periféricas (CMP), sin estímulo, obtenidas a partir de donantes sanos realizándose infecciones in vitro con ambos virus. Se utilizaron como inóculos plasmas o sueros provenientes de distintos pacientes HCV+ para las infecciones con HCV y sobrenadantes de cultivo HIV+ para las infecciones con HIV. Se puso a punto un esquema de infección tal que el cultivo conservara una adecuada viabilidad celular y a la vez, se lograra una alta eficiencia en la infección de HCV y de HIV. Se obtuvieron las CMP por centrifugación en gradiente de Ficoll- Hypaque y se distribuyeron a razón de 2 x106 células por tubo. Se cultivaron en estufa gaseada (5%CO2) hasta el cuarto dia de cultivo en que se realizó la infección con el primer virus HCV o HIV según el esquema de infección. Al 6to día de cultivo, se realizó el lavado de las células con buffer fosfato y se infectó con el segundo virus, HIV o HCV según correspondiere. Al día siguiente, se realizó el lavado con PBS. El esquema de infección es el siguiente: Tubos A/B/C: 1ero HCV, 2do HIV (HCV/HIV). Tubos D/E/F: 1ero HIV, 2do HCV (HIV/HCV). Tubo G: control HIV. Tubo H: Control HCV. Tubo I: sin infectar. El éxito de la infección por HCV se determinó con estudios de nested RT-PCR y el de la infección por HIV con la cuantificación de antígeno p24 por técnica de enzimoinmunoensayo. En ambos casos se utilizaron sobrenadantes de cultivo (SN) obtenidos a lo largo de 4 semanas de cultivo. Tomando en cuenta los resultados en 6 dadores sanos, el 100% de las infecciones por HIV resultaron exitosas. A pesar de la variabilidad obtenida en la curva de p24 en los distintos individuos, al comparar dichas curvas con la curva control de HIV, se observan valores disminuidos de p24 en aquellos tubos en donde la infección por HCV se había realizado en primer lugar. Al considerar los tubos infectados previamente con HIV, el 50% (3/6) arrojaron resultados con niveles más elevados de p24 respecto del control de HIV. Considerando solamente las infecciones exitosas con HCV, se observó una mayor positividad al realizar la detección por la técnica de PCR en los sobrenadantes de los tubos HIV/HCV (Tubos D/E/F) (p=0.03). Observamos en este sistema de infección in vitro que la infección previa por HIV de las CMP ejercería un efecto “facilitador” para la entrada del HCV. Tomando en cuenta la curva de p24 perteneciente al controles de HIV y comparándola con aquellas obtenidas en los tubos con distintos esquemas de infección se observa que existe un efecto negativo más frecuente cuando se realiza primero la infección por HCV y luego la de HIV. El HCV inoculado en primer lugar ejercería un efecto "inhibitorio" al momento de infectar con HIV.