Detección de Fe catalíticamente activo en sistemas biológicos

ROBELLO E; GALATRO A; PUNTARULO S

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, LXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El Fe es esencial en el cerebro para realizar numerosas funciones como la división celular, la síntesis de mielina y neurotransmisores, y además su acumulación se ha asociado al daño oxidativo medido en la enfermedad de Alzheimer. El pool de iones de Fe catalíticamente activos, conocido como labile iron pool (LIP), constituye un depósito de Fe débilmente unido a una población altamente heterogénea de compuestos orgánicos y se encuentra disponible para catalizar reacciones redox en los sistemas biológicos. Las técnicas reconocidas para determinar el LIP son la Espectroscopía de Resonancia Paramagnética Electrónica (EPR) y la Fluorometría empleando calceína (CA) como sonda. En ambos casos, se determina el contenido de Fe sin discriminar la especie a la cual el Fe se encuentre unido. El objetivo del presente trabajo fue analizar comparativamente la capacidad de ambas técnicas para detectar complejos naturales y sintéticos de Fe, que forman parte de la composición cualitativa del LIP in vivo. Se utilizaron concentraciones fisiológicas (10 μM) de los siguientes complejos de Fe: Fe-citrato (1:2), Fe-ATP (1:20), Fe-EDTA (1:2), Fe-histidina (1:5), mononitrosilos (monoNICs), dinitrosilos (diNICs) y una solución estándar de Fe2+ quelado a la solución reguladora (control). Los espectros de EPR para Fe 10 μM son detectables y coincidentes para todos los complejos empleados. El uso de la técnica fluorométrica con CA, permitió la cuantificación de Fe (10±2μM) en todos los casos, excepto cuando se emplearon monoNICs (1,1±0,9 μM). Estos resultados avalan experimentalmente el concepto de la definición operacional del LIP, ya que ambos ensayos se basan en la capacidad de la deferroxamina de desplazar al quelante de Fe, ya un complejante fisiológicos (EPR) o a la CA (flurométrica). Situaciones fisiológicas o patológicas que modifiquen la composición del LIP celular requerirán el empleo simultáneo de ambas técnicas para describir adecuadamente el efecto estudiado.