Caracterización a nivel de canal único de receptores nicotínicos homoméricos.

RAYES DIEGO; SPITZMAUL GUILLERMO; BOUZAT CECILIA

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas. (SAIC, SAI, SAFE, SAB; SAB, SAN, SAF); 2004

Sociedad Argentina de Neuroquímica (SAN); Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica (SAIB); Sociedad Argentina de Biofísica (SAB), Sociedad Argentina de Biología (SAB), Sociedad Argentina de Fisiología (SAF), Sociedad Argentina de Farmacología Exp

La familia de receptores “Cys-Loop” comprende a receptores nicotínicos, de serotonina (5HT3-R), de GABA (AyC) y de glicina.  Dentro de los nicotínicos existen receptores heteropentámericos y el homopentámero a7  neuronal. Dado su  rol esencial en diversos procesos del sistema nervioso, la farmacología de este último ha sido ampliamente estudiada. Sin embargo no se ha logrado hasta el momento una caracterización electrofisiológica a nivel de canal único debido a su baja expresión en sistemas heterólogos. Con la finalidad de encontrar un modelo válido para realizar este estudio, utilizamos un receptor quimérico con el dominio extracelular de a7 y los segmentos transmembranales  de 5HT3-R y que presenta alta expresión en células. Además realizamos mutaciones sobre este receptor para aumentar la conductancia y poder así resolver los canales únicos.   La activación por agonistas permite observar eventos de apertura con conductancia de 99 pS.  La mínima  concentración a la cual se observa activación es 10, 50 y 300 mM para nicotina, ACh y colina respectivamente.  A estas concentraciones los tiempos de estado abiertos son semejantes para nicotina y ACh,  siendo 3 veces más breves los eventos activados por colina.  Con ninguno de los agonistas estudiados  se observan eventos repetitivos de apertura y cierre  a alta concentraciones, sugiriendo un proceso de desensibilización   rápido.  Tanto nicotina como ACh, actúan ,además,  como bloqueadores de canal  abierto, siendo las constantes de afinidad para el bloqueo (KB) de 18.7  y 45mM respectivamente.  A su vez, se observa una reducción de la conductancia con concentraciones crecientes de Ca++ y  Mg++, indicando  un bloqueo rápido de canal abierto por parte de los mismos (KB= 7.8 y  4mM respectivamente).   Este trabajo tiene como objetivo establecer un modelo válido para el estudio a nivel de canal único de la región extracelular del receptor a 7 con el fin de dilucidar mecainismos de acción de drogas y fármacos que modulan su actividad.