CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA MAYORITARIA DE VIROPLASMA P9-1 DEL VIRUS DEL MAL DE RÍO CUARTO (MRCV)

LLAUGER GABRIELA; MELERO ROBERTO; MONTI DEMIAN; SYCZ GABRIELA; HUCK IRIART CRISTIAN; CERRUTI MARIA ; KLINKE SEBASTIÁN; ARRANZ ROCÍO; STERCKX YANN; ALFONSO VICTORIA; ARELLANO SOFÍA MAITÉ; CARAZO JOSÉ-MARÍA; GOLDBAUM FERNANDO; DEL VAS MARIANA; OTERO LISANDRO

Congreso; XIII Congreso Argentino de Virología; 2021

El virus de Mal de Río Cuarto (MRCV, Fijiviridae, Reoviridae) causa la principal enfermedad del maíz en Argentina. La replicación y el ensamblado viral ocurren en viroplasmas en el citoplasma celular tanto de gramíneas como de insectos vectores, y su formación es un paso crítico para el establecimiento de la infección. La proteína no estructural P9-1 es el componente mayoritario de los viroplasmas, forma homomultímeros, interactúa con la proteína minoritaria de viroplasma P6, posee actividad ATPasa y capacidad de unión la ARN. Dentro de la familia Reoviridae, las proteínas de viroplasma de estructura conocida dan lugar a octámeros cilíndricos. Para avanzar en el estudio del proceso de ensamblado que da lugar a la formación de los viroplasmas y determinar la estructura y estado cuaternario de P9-1, en primer lugar determinamos que los 24 residuos C-terminales de dicha proteína son fundamentales para la formación de cuerpos de inclusión tipo viroplasmas in vivo y para su multimerización in vitro. Mediante un abordaje estructural integral que involucró técnicas de cristalografía de rayos X, criomicroscopía electrónica (CryoEM), dispersión de rayos X de bajo ángulo (SAXS) y estudios bioquímicos adicionales, determinamos que P9-1 forma dímeros que se unen con otros dímeros a través de sus brazos C-terminales para dar lugar a una población de arreglos estructurales de decámeros y dodecámeros que conservan la forma cilíndrica previamente observada en otros reovirus. Estas estructuras poseen además loops orientados hacia el interior del cilindro, donde se encuentran los posibles sitios de unión a ARN, así como motivos PEST (señales condicionales de degradación vía proteasoma). Este trabajo presenta evidencia directa de la existencia de dos estados cuaternarios que hasta ahora no habían sido descriptos para una proteína mayoritaria de viroplasma y contribuye a la comprensión de la estructura y morfogénesis de los viroplasmas de un reovirus vegetal. Estas estructuras poseen además loops orientados hacia el interior del cilindro, donde se encuentran los posibles sitios de unión a ARN, así como motivos PEST (señales condicionales de degradación vía proteasoma). Este trabajo presenta evidencia directa de la existencia de dos estados cuaternarios que hasta ahora no habían sido descriptos para una proteína mayoritaria de viroplasma y contribuye a la comprensión de la estructura y morfogénesis de los viroplasmas de un reovirus vegetal.