Diseño y desarrollo de una estrategia de potenciación del baculovirus AcMNPV como herramienta de control de lepidópteros plaga

LOPEZ MARÍA GABRIELA; BARROS GABRIELA; ALFONSO VICTORIA; TABOGA OSCAR

Congreso; V Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2021

AAM

Los programas de manejo integrado de plagas (MIP) constituyen hoy en día la estrategia más aceptada para intentar reducir el uso de insecticidas químicos. En este marco, los biopesticidas juegan un rol fundamental, complementando y en algunos casos reemplazando a los métodos convencionales de manejo. Dentro de este grupo, los baculovirus se presentan como una opción efectiva y segura, aunque se requiere de trabajos de mejoramiento para poder reducir los tiempos de infectividad y mejorar su competitividad frente a plaguicidas químicos. En ensayos previos demostramos que la proteína GP37 incluida en cuerpos de oclusión de baculovirus recombinantes mejora su infectividad en relación a un baculovirus control, por lo que el objetivo de este trabajo fue explorar el desarrollo de una estrategia combinada para aumentar la infectividad oral del baculovirus AcMNPV mediante la incorporación en sus cuerpos de oclusión de dos proteínas con probados efectos de disrupción de la membrana peritrófica del intestino de las larvas susceptibles: GP37 y quitinasa (ChiA), las que se espera que al actuar in situ de manera sinérgica logren optimizar el ingreso de los baculovirus y acelerar la infección primaria.En primer lugar, se caracterizaron dos baculovirus recombinantes que portan la GP37 de distintas especies de baculovirus como fusión a poliedrina (POLH): AcGP37 y EpapGP37. En una segunda etapa se desarrollaron líneas celulares de insecto Sf9 establemente transformadas con el gen ChiA con y sin la señal de localización nuclear KRKK, regulado por el promotor de POLH inducible por infección y secuencias regulatorias adicionales. La construcción de las líneas Sf9ChiA y Sf9ChiAKRKK resultó exitosa y luego de ser infectadas, ambas fueron capaces de expresar las proteínas en altos niveles. Además, fue posible reconocer la presencia de ChiA en muestras de poliedros aislados de infecciones de ambas líneas transgénicas con virus AcMNPV salvajes y baculovirus recombinantes GP37. Los resultados sugieren que la señal de localización nuclear no juega un rol de importancia en los niveles de incorporación de ChiA a los poliedros.En conclusión, fue posible generar dos nuevos tipos de poliedros recombinantes con el objetivo de potenciar la infectividad de AcMNPV. La originalidad de la estrategia explorada radica en la incorporación de ChiA de forma pasiva en los poliedros, no formando parte de la estructura de POLH, lo que constituye una herramienta de gran valor en la obtención de inóculos de baculovirus salvajes con capacidades mejoradas e incluso en la generación de poliedros dobles recombinantes, lo que podrá enriquecer los programas de MIP.Como perspectiva, se realizarán bioensayos para evaluar y comparar la efectividad de los inóculos desarrollados en este trabajo y poder definir la mejor estrategia de potenciación de la infectividad de AcMNPV contra lepidópteros plaga.