Dinámica evolutiva de las poblaciones virales del virus de la hepatitis C en la infección crónica

ALFONSO VICTORIA; SOOKOIAN SILVIA; CAMPOS RODOLFO HÉCTOR

Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina

Congreso; VII Congreso Argentino de Virología; 2002

Sociedad Argentina de Virología

El virus de hepatitis C (HCV) es el principal agente causal de hepatopatía crónica severa. El genoma viral es ARN de polaridad positiva, que le confiere como principal característica su elevada variabilidad. HCV circula como cuasiespecies en el individuo infectado lo que le permite adaptarse a distintas condiciones del entorno, de manera que algunas subpoblaciones virales emerjan en respuesta a un proceso de selección. De este modo el sistema virus-hospedador se encuentra en continua co-evolución. La respuesta inmune del hospedador ejerce una fuerte presión selectiva sobre las proteínas de la envoltura viral. El gen de la glicoproteína de envoltura E2 desempeña un papel importante en este aspecto, ya que posee las regiones más variables de todo el genoma (HVR1 y HVR2), epitopes celulares, humorales y los motivos de unión al receptor celular CD81. En un estudio previo de la evolución de la HVR1 durante 29 meses, en cuatro pacientes con infección crónica tratados con interferón alfa (IFN a), se puso en evidencia que la evolución en la región se realizaba principalmente por un mecanismo de shift  de las poblaciones virales (selección de cuasiespecies minoritarias), más que por la selección sucesiva de mutaciones puntuales en forma acumulativa (drift). El objetivo de este trabajo fue estudiar la dinámica evolutiva de una región del gen E2 de HCV en un paciente con infección persistente, sometido a tratamientos sucesivos con IFN a (6 meses) y con IFN a más ribavirina (12 meses). El fragmento genómico estudiado abarcó la HVR1, la HVR2 y regiones conservadas que se postulan como participantes de la unión del virus al CD81. Los sueros estudiados fueron: previo al tratamiento con IFN a (0i); siete meses una vez finalizada la monoterapia (13i); cuatro meses después, previo al comienzo con el tratamiento combinado (0r) y al finalizar la terapia con IFN a más ribavirina (12r). Se extrajo el ARN viral y se amplificó la región por RT-PCR. Los amplicones fueron clonados en vectores plasmídicos y entre 5 y 11 clones fueron  secuenciados de cada tiempo. se calcularon las distancias genéticas (dg) entre secuencias y se construyeron árboles filogenéticos según el método de neigbour-joining. Los resultados muestran una dinámica evolutiva de la región con diversidad de cuasiespecies. En tres de las cuatro muestras analizadas se distinguen al menos 2 subpoblaciones virales. La composición de cuasiespecies se evidencia en distintas distribuciones de dg, a pesar de que las medias sean similares en todos los tiempos. Además el estudio filogenético permite ver la evolución ded las poblaciones virales a través del tiempo: en 0i se diferencian al menos 3 linajes de secuencias, en 13i se ve claramente que hay una evolución de 2 de las 4 subpobalciones de 0i; 4 meses después, los linajes encontrados en 0r resultan similares a los encontrados en 13i. Al finalizar el tratamiento con ribavirina (12r) se encuentra una sola subpoblación viral, heterogénea, que evoluciona desde uno de los linajes presentes en el tiempo anterior. Este proceso evolutivo de enriquecimiento de una subpoblación  se corresponde con el análisis de la secuencia de aminoácidos, donde se observa que los 8 clones analizados en el último tiempo (12r) -no obstante la heterogeneidad presente en toda la región analizada-  tienen la misma secuencia  en la HVR1, seleccionada desde uno de los linajes del pretatamiento (0i). Conclusión: el análisis evolutivo de una región de E2 que incluye la HVR1 y 2, en un paciente que recibió dos tratamientos, durante 29 meses, muestra una dinámica de cuasiespecies que evoluciona hacia la selección de una subpoblación. Este proceso evolutivo estaría guiado por la HVR1.