LA VÍA DE SENSORES DE ÁCIDOS NUCLEICOS CITOPLASMÁTICOS CGAS-STING DETECTA EL GENOMA DE LOS BACULOVIRUS E INDUCE LA PRODUCCIÓN DE INTERFERONES DE TIPO I Y III EN CÉLULAS DE MAMÍFEROS

AMALFI SABRINA; MOLINA GUIDO NICOLÁS; TABOGA OSCAR; ALFONSO VICTORIA

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología; 2019

Introducción: La respuesta inmune innata es la primera línea de defensa contra las infecciones virales. Los sensores citosólicos de ácidos nucleicos, presentes en diversos tipos celulares de mamíferos, están involucrados en la detección de virus DNA o RNA y cumplen un papel relevante en el control temprano de la infección. Los baculovirus son virus envueltos, dsDNA, patógenos de insectos. Si bien no pueden infectar células de mamífero, son capaces de transducir genes bajo la regulación de un promotor adecuado en variados tipos celulares. Además, está descripta la capacidad de estos virus en despertar una potente respuesta inmune innata beneficiosa para su uso como vacunas o como inmunomoduladores y perjudicial para su utilización como vectores virales para el delivery de genes. Previamente, hemos demostrado en nuestro laboratorio, que el citoplasma es el principal destino que alcanza el genoma baculoviral en distintos tipos celulares no inmunes de mamífero. Objetivo: Estudiar la participación de moléculas de las vías de detección de DNA citosólico en la respuesta desencadenada por la infección no productiva con baculovirus. Materiales y métodos: La vía cGAS-STING en fibroblastos murinos se estudió mediante edición génica por CRISPR-Cas9, mientras que en las células epiteliales humanas HEK293 y HEK293 T se realizaron estudios de transcomplementación con cGAS o cGAS y STING, respectivamente. La actividad antiviral inducida en las células por los baculovirus se evaluó a partir de infecciones con el virus de la estomatitis vesicular. Además, se evaluaron las eficiencias de expresión de un transgén portado en el genoma baculoviral y se realizaron mediciones del mRNA de distintas citoquinas por RT-qPCR. Resultados: Se observó que STING es necesario para el establecimiento de un estado antiviral por baculovirus en células de mamífero no inmunes y se determinó que el genoma es detectado por al menos dos vías que llevan a la activación de STING. El detector cGAS indujo la respuesta celular más potente y fue necesario para la producción de IFN β. La activación de STING, de un modo cGAS independiente, dio lugar en células epiteliales humanas, a la producción de IFN λ1, lo que sugiere la participación de los IFN tipo III en el estado antiviral inducido por baculovirus. Por otra parte, se demostró la participación de cGAS y STING en una fuerte atenuación de la eficiencia de expresión de un gen reportero vehiculizado por baculovirus. Adicionalmente, se determinó que la respuesta antiviral y la producción de IFN β no se ven afectadas al inhibir el detector de DNA citosólico RNA Pol III, lo que muestra que ésta no es una vía relevante en el caso de los baculovirus. Conclusión: La detección del genoma baculoviral por la vía de detección de ácidos nucleicos GAS-STING cumple un papel determinante en el establecimiento del estado antiviral que se produce, dado por IFN I y III, y en la eficiencia de los baculovirus como transportadores de genes.