ESTUDIO DEL IMPACTO DE LOS BACULOVIRUS EN CÉLULAS DE MAMIFEROS NO IMMUNES

AMALFI SABRINA; MOLINA GUIDO NICOLÁS; TAVARONE EUGENIA; TABOGA OSCAR; ALFONSO VICTORIA

CABA

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Sociedad Argentina de Virología

Los baculovirus son virus envueltos, con genomas DNA de doble cadena, patógenos de insectos. Estos virus son capaces de transducir genes en células de mamífero, pero no pueden replicar su genoma en este hospedador, dando lugar a un ciclo viral abortivo sin producción de progenie infectiva. Dado que la primera línea de defensa en mamíferos contra agentes virales esta constituida por la producción de INF I en diferentes tipos celulares y que se ha visto que la infección con baculovirus produce IFN I por vías no dependientes de TLR en células no inmunes, nos proponemos estudiar en estas células la participación de receptores citoplasmáticos de ácidos nucleicos en la producción de un estado antiviral por baculovirus. cGAS es una enzima que reconoce DNA doble cadena de manera inespecífica produciendo la activación de STING, una proteína que se activa induciendo la producción de IFN-I. Por otra parte, la RNA polimerasa III es considerada un sensor indirecto que transcribe DNA rico en dAdT, produciendo RNA agonistas de RIG-I y MDA5 que llevan a la producción de IFN-I. En primer lugar, a fin de determinar el destino genómico de los baculovirus en células de mamífero no inmunes se construyó un baculovirus recombinante y se evaluó en ensayos de infección la expresión de genes reporteros a partir de promotores reconocidos por las maquinarias transcripcionales nuclear o citoplasmática, aportada en este último caso en trans por coinfección con un virus vaccinia recombinante. En células MEF, 3T3, L929 y BHK se determinó que el citoplasma es el destino mayoritario del DNA baculoviral. Para estudiar la respuesta de IFNβ generada por los baculovirus en fibroblastos murinos, se analizó su nivel de transcripción por RT-qPCR a las 4 horas postinfección. En células 3T3 y MEF, infectadas a moi 100, la producción de IFNβ resultó ser de 3200 y de 412 veces más respecto del control, respectivamente. Adicionalmente, se determinó que esta inducción no se ve afectada al inhibir la RNA pol III con ML60-218. Por otra parte, los niveles transcripcionales de los sensores citoplasmáticos MDA5, STING, TLR9 y cGAS en células 3T3 se mantuvieron estables luego de la infección con baculovirus. Además, se estudió la generación de un estado antiviral por los baculovirus en fibroblastos murinos. Así, la infección con AcMNPV a moi 50, resultó en una protección del 63 % de las células frente a una infección con el virus de la estomatitis vesicular (VSV). En conclusión, el genoma baculoviral, disponible mayoritariamente en el citoplasma de células no inmunes, produce un fuerte incremento en la expresión del gen de INFβ, de un modo independiente de la vía de la RNA Pol III, sugiriendo a STING como el sensor involucrado. La comprensión de los mecanismos de detección de los PAMP baculovirales en diferentes tipos celulares permitirá diseñar estrategias para aumentar esta respuesta y así evaluar su uso masivo como antiviral inespecífico para el control de infecciones virales en animales.