Desarrollo de un método diagnóstico basado en la incorporación de antígenos de Babesia bovis en cuerpos de oclusión de baculovirus

PALLARÉS HORACIO MARTÍN; ALFONSO VICTORIA; TABOGA OSCAR; WILCOWSKI SILVINA; LOPEZ MARÍA GABRIELA

CABA

Jornada; XXXVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2016

Sociedad Argentina de Virología

Los baculovirus son virus de insectos usados principalmente en el control biológico de plagas y la expresión de proteínas recombinantes. La característica de estos virus de generar estructuras de resistencia llamadas cuerpos de oclusión (OBs o poliedros) conformados mayoritariamente por la proteína poliedrina (POLH) los hace especialmente atractivos desde el punto de vista biotecnológico, ya que a partir de fusiones traduccionales entre POLH y proteínas de interés se pueden generar poliedros quiméricos fácilmente purificables a bajo costo. Estudios previos realizados en el Instituto identificaron en un microarreglo de péptidos diseñado a partir del proteoma in silico del parásito bovino , cinco péptidos antigénicos de 12 aminoácidos cuya inmunoreactividad resultó positiva frente a sueros de bovinos infectados. Sin embargo, los péptidos no fueron reconocidos por sueros vacunos específicos en un ensayo de inmunoadsorción ligada a enzimas (ELISA) probablemente debido a su pequeño tamaño, lo cual imposibilitó su adherencia a los pocillos de las placas.Teniendo en cuenta las ventajas que propone la utilización de los baculovirus como sistema de expresión de proteínas recombinantes y considerando que la poliedrina podría ser una proteína de anclaje adecuada para la utilización de los péptidos antigénicos de (paBb) en un método de diagnóstico para la babesiosis bovina, el objetivo principal de este trabajo es obtener poliedros que incorporen eficientemente a los paBb, aislarlos y caracterizarlos para su potencial uso en el desarrollo de un ELISA diagnóstico de la enfermedad. Para ello, se diseñaron y obtuvieron cinco baculovirus que expresan cada paBb como fusión traduccional a POLH y un sexto virus que expresa dos repeticiones de los cinco paBb en seguidilla, también como fusión a POLH. Para aumentar la probabilidad de formación de poliedros que incorporen los paBb es necesario el aporte de POLH salvaje. Para ello, en todos los casos los virus presentaron una copia extra del gen POLH (aporte en cis) y se realizaron infecciones de líneas celulares empaquetadoras que expresan POLH (aporte en trans).Los poliedros quiméricos obtenidos bajo las condiciones de infección mencionadas fueron aislados en base a su insolubilidad a pH neutro y analizados en su composición de manera cualitativa por Western blot, demostrando la presencia de las proteínas quiméricas y escasa presencia de viriones ocluidos. Los paBb presentes en los poliedros disueltos con carbonato de sodio fueron eficientemente reconocidos en ensayos de ELISA enfrentados con sueros de bovinos infectados, demostrando que la fusión a poliedrina no afectó su reconocimiento inmunológico. En conjunto, estos resultados alientan el potencial uso de este sistema como herramienta de expresión y purificación de antígenos de interés para el desarrollo de test de diagnóstico por ELISA.