Estudio de la infección de los baculovirus en células de mamífero no inmunes

AMALFI SABRINA; MOLINA GUIDO NICOLÁS; TAVARONE EUGENIA; TABOGA OSCAR; ALFONSO VICTORIA

CABA

Jornada; XXXVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2016

Sociedad Argentina de Virología

Los baculovirus son patógenos de insectos capaces de ingresar en células de mamífero sin establecer una infección productiva. Se ha visto que despiertan una respuesta inmune innata muy potente en mamíferos, por lo que se los estudia como antivirales y adyuvantes; sin embargo, los cambios fenotípicos que sufren las células de mamífero tras la infección con estos virus no han sido suficientemente estudiados. Así, nuestro objetivo fue evaluar el impacto de los ácidos nucleicos de los baculovirus en la generación de un estado antiviral en células no inmunes infectadas. En primer lugar, evaluamos la presencia y proporción de ADN viral en el citoplasma de distintas células de mamífero no inmunes respecto del ADN que alcanza el núcleo. Para ello, construimos baculovirus recombinantes y realizamos ensayos de infección evaluando la expresión de genes reporteros a partir de promotores reconocidos por las maquinarias transcripcionales nuclear o citoplasmática, aportada en este último caso en por coinfección con un virus vaccinia recombinante. Los resultados, en todos los tipos celulares ensayados, mostraron que la cantidad de genomas baculovirales disponibles para ser transcriptos en el citoplasma es mayor que la que llega al núcleo. Por otra parte, evaluamos la respuesta antiviral y la expresión de INF β dada por la infección con baculovirus en la línea celular 3T3, derivada de fibroblastos de embrión murino. Se realizaron infecciones con baculovirus a distintas multiplicidades de infección (MOI) durante 4 horas y se estudió la actividad antiviral de los sobrenadantes de infección y la expresión de ARNm de INF β en las células por RT-qPCR. Los resultados mostraron que los sobrenadantes de infección de los baculovirus en células 3T3 a MOI 25 y 10, son capaces de reducir las placas de lisis del sistema VSV/células Vero en un 78 % y 23 %, respectivamente. En coincidencia, se detectó un aumento en la expresión INF β de 1600 veces en las células infectadas a una MOI de 25 respecto del control sin infectar. También se realizaron ensayos de actividad antiviral de forma directa en células 3T3, en los que se evaluó la reducción del efecto citopático del VSV, dada por la infección previa con baculovirus. Los resultados se obtuvieron midiendo la absorbancia a 595 nm de las células teñidas con Cristal Violeta. Así, la protección de la monocapa de 3T3 fue del 63 % al infectar con baculovirus a una MOI de 50. Los resultados en su conjunto, muestran la presencia de genomas baculovirales en el citoplasma de células fibroblásticas tras la infección y la capacidad de estos virus de inducir en células no inmunes un estado antiviral a través de la producción de INF β. A partir de estos hallazgos, podremos estudiar la participación de los receptores citoplasmáticos de ácidos nucleicos en la respuesta antiviral y diseñaremos baculovirus recombinantes para modificarla.