OPTIMIZACIÓN DE LA INCLUSIÓN DE PROTEÍNAS DE INTERÉS EN CUERPOS DE OCLUSIÓN DE BACULOVIRUS

LOPEZ MARÍA GABRIELA; PALLARÉS HORACIO MARTÍN; ALFONSO VICTORIA; TABOGA OSCAR

CABA

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología y II Congreso Latinoamericano de Virología.; 2015

Sociedad Argentina de Virología

Los baculovirus son virus de insectos usados principalmente en el control biológico de plagas y la expresión de proteínas recombinantes. La característica de estos virus de generar estructuras de resistencia llamadas cuerpos de oclusión (OBs o poliedros) conformados mayoritariamente por la proteína poliedrina (POLH), los hace especialmente atractivos desde el punto de vista biotecnológico. El objetivo de este trabajo consiste en desarrollar un método de obtención de poliedros quiméricos mediante fusiones traduccionales entre poliedrina y proteínas de interés, de manera de producir altos rendimientos de proteínas recombinantes fácilmente purificables a bajo costo, en un sistema eucariota. Para ello se diseñaron y obtuvieron baculovirus que expresan las fusiones POLHpprGFP o ΔPOLHpprGFP, siendo ppr un sitio de clivaje para la proteasa PreScission (GE), POLH la proteína poliedrina completa y ΔPOLH, el fragmento comprendido entre los aminoácidos 19 a 110 de poliedrina. Para aumentar la probabilidad de formación de poliedros que incorporan proteínas, se coexpresó una copia adicional del gen poliedrina salvaje. Se ensayaron distintas condiciones de infección aportando esa copia en cis (en el genoma del baculovirus, polh+) o en trans (aportada por líneas celulares que expresan polh). Así, se determinó que la mayor proporción de poliedros fluorescentes se obtiene cuando se infectan líneas trans-empaquetadoras con el baculovirus AcPOLHpprGFP de genotipo polh+. En particular, la línea que mostró mayor producción de poliedros quiméricos al ser infectada fue la Sf9POLHmut, que expresa una copia de poliedrina mutada en el residuo de aminoácido 44 que genera poliedros de mayor tamaño y con escasa oclusión viral. Las infecciones con el baculovirus AcΔPOLHpprGFP incorporaron solo trazas de la fusión. Los poliedros quiméricos obtenidos bajo las condiciones de infección mencionadas fueron aislados en base a su insolubilidad a pH neutro y alto coeficiente de sedimentación y analizados en su composición de manera cualitativa por Western blot, demostrando la presencia de la proteína quimérica y escasa presencia de viriones ocluidos. La proteína GFP quimérica presente en los poliedros disueltos con Na2CO3 fue eficientemente reconocida en ensayos de ELISA, demostrando que la fusión a poliedrina no afectó su reconocimiento inmunológico. Asimismo, los poliedros disueltos tratados con la proteasa PreScission dieron altos rendimientos de proteína GFP soluble. En conjunto, estos resultados alientan el potencial uso de este sistema como herramienta de expresión y purificación de antígenos de interés en el sistema baculovirus.