Efecto de la deleción del gen ac109 del baculovirus AcMNPV en su interacción con células de mamífero.

ALFONSO VICTORIA; AMALFI SABRINA; COSTA NAVARRO GUADALUPE SOLEDAD; LOPEZ MARÍA GABRIELA; TABOGA OSCAR

CABA

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología y II Congreso Latinoamericano de Virología.; 2015

Sociedad Argentina de Virología

Los baculovirus son patógenos de insectos utilizados en el control biológico de plagas y como vectores de expresión de proteínas heterólogas en cultivos de células de insecto y en larvas de lepidópteros. Además, se estudia su utilización en terapia génica, como vacunas e inmunomoduladores en mamíferos, pues son capaces de ingresar en estas células pero no de replicar en ellas. La proteína Ac109 de Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus es esencial para la replicación viral en insectos. Nuestros trabajos previos han descripto que es una proteína localizada en la nucleocápside y han mostrado su relevancia en los procesos de envoltura y oclusión de los viriones en el núcleo celular y en la llegada de las nucleocápsides a los núcleos de nuevas células infectadas. Con el objeto de determinar si Ac109 está involucrada en la interacción de los baculovirus con las células de mamífero, se evaluó la presencia de DNA viral en citoplasma y núcleo utilizando virus defectivos para esta proteína. Se construyeron baculovirus ac109 knockout (KO) que además contenían el gen de la proteína verde fluorescente eGFP bajo la regulación del promotor citoplasmático T7 o del promotor de la β actina de pollo activo en el núcleo de las células de mamífero, se evaluó la integridad de los viriones a través de la presencia y proporción de las proteínas mayoritarias GP64 y VP39 y se analizó la fluorescencia en células de mamífero tras la infección con cantidades equivalentes de virus salvajes y KO. La cantidad de células que mostraron la presencia de DNA viral en el citoplasma o en núcleo disminuyó dos órdenes de magnitud cuando los viriones no poseían Ac109 en su estructura. Dado que la integridad de la envoltura de los viriones nos permite asumir que la entrada de los virus a las células no está alterada, estos resultados muestran que el desensamblado de las nucleocápsides y liberación del genoma en ambos comportamientos podría verse afectado, mientras que, a diferencia de lo observado en células de insecto, la entrada de las nucleocápsides en el núcleo no parece estar impedida.