Estudio de la localización subcelular de la proteína Ac109 de Autographa californica multiplenucleopoliedrovirus

RECA SOL RITA; MARONICHE GUILLERMO ANDRÉS; TABOGA OSCAR; ALFONSO VICTORIA

Vaquerías

Encuentro; XXXII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2012

Sociedad Argentina de Virología

Los baculovirus son patógenos de insectos utilizados en el control biológico de plagas y como vectores de expresión de proteínas heterólogas en cultivos de células de insecto y en larvas de lepidópteros. Poseen un ciclo de infección bifásico y complejo en el cual participan dos fenotipos virales: los viriones brotados (BV) y los derivados de los cuerpos de oclusión (ODV). El análisis de los genomas baculovirales hasta hoy secuenciados revela un grupo de 37 genes conservados, llamados core que poseen papeles relevantes en el ciclo viral. Uno de los genes core en el nucleopoliedrovirus múltiple de Autographa californica (AcMNPV) es el ac109. Resultados previos indican que este gen codifica para una proteína estructural esencial para la diseminación viral en cultivo celular y para la infectividad de los cuerpos de oclusión. Con el propósito de aportar nuevas evidencias sobre el rol de la proteína Ac109 de AcMNPV, este trabajo tuvo como objetivo estudiar la cinética de localización subcelular in vivo de Ac109 durante la infección viral. Para ello, se construyó y caracterizó un baculovirus recombinante con una segunda copia de Ac109 fusionada a un fluoróforo (Ac109-YFP). La presencia de la proteína de fusión en distintos compartimentos de células Sf9 se evaluó por microscopía confocal durante el progreso de la infección. Además, se determinó la localización subcelular de la proteína fusionada a YFP en ambos extremos expresada fuera del contexto de la infección viral. Los resultados de transfección con el gen ac109 aislado mostraron que la proteína se localiza en el citoplasma de células de insecto. Empleando el virus recombinante, los resultados mostraron que a partir de las 7 horas post-infección (hpi) la proteína Ac109 se detecta principalmente en el citoplasma celular, aumentando su expresión hasta las 11-12 hpi. Con el avance de la infección, se observó la entrada de Ac109 al núcleo de la célula así como su acumulación en la ring-zone. Más tarde, se detectaron cúmulos de proteína fluorescente en regiones definidas dentro del núcleo. Finalmente, a tiempos muy tardíos de la infección, Ac109 se detecta de manera débil y difusa tanto en núcleo como en citoplasma. En algunas células, se observó la proteína de fusión concentrada alrededor de los poliedros en formación o en los poliedros ya formados. Además, cuando la intensidad de la fluorescencia era muy elevada, también se observaron cúmulos citoplasmáticos. En conclusión, el gen ac109 de AcMNPV codifica una proteína estructural tardía, que sólo ingresa al núcleo en el contexto de la infección. La localización subcelular de Ac109 durante el ciclo viral dependería de algún factor viral o celular inducido por la infección. Por otra parte, la presencia de la proteína en las zonas del núcleo dónde se lleva a cabo la envoltura y posterior oclusión de los ODV sugiere su participación en estos procesos.