DESARROLLO DE UN SET DE VECTORES PARA LA CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE PROTEÍNAS POR LOCALIZACIÓN SUBCELULAR Y FRET EN CÉLULAS DE INSECTO

MARONICHE GUILLERMO ANDRÉS; MONGELLI VANESA CLAUDIA; ALFONSO VICTORIA; LLAUGER GABRIELA; DEL VAS MARIANA

Ciudad de Guadalajara, Jalisco

Encuentro; VII Encuentro Latinoamericano y del Caribe sobre Biotecnología Agropecuaria REDBIO Mexico 2010 "La Biotecnología frente a los grandes retos del siglo XXI"; 2010

REDBIO

Los insectos constituyen un importante componente del sistema agroecológico. Intervienen positivamente asistiendo la reproducción sexual de las plantas como polinizadores y negativamente como pestes o vectores de enfermedades, causando grandes pérdidas económicas. La genómica de insectos, actualmente en pleno desarrollo, ha recibido un importante impulso con la secuenciación del genoma de diversas especies como por ejemplo la abeja, el gorgojo y el áfido de la arveja. El aprovechamiento de la vasta información generada requerirá de sistemas de alto procesamiento para la caracterización funcional de las proteínas codificadas por los genomas y de su interactoma, paso fundamental hacia la comprensión integral del funcionamiento de los organismos. En este sentido, hemos desarrollado una serie de vectores diseñados para expresar proteínas de fusión fluorescentes en células de insectos, compatibles con la rápida y sencilla tecnología de clonado Gateway y especialmente útiles para estudios masivos de localización subcelular y FRET. Los mismos permiten expresar proteínas de interés fusionadas a las proteínas fluorescentes GFP, CFP, YFP o mCherry, ya sea por el extremo amino como por el carboxilo. Adicionalmente, desarrollamos un conjunto de marcadores fluorescentes de organelas, útiles como referencia en experimentos de colocalización. El correcto funcionamiento de los vectores fue demostrado estudiando la localización subcelular e interacción in vivo de la proteína P9-1 de MRCV en células Sf9. El sistema desarrollado demostró ser adecuado para estudios rápidos y sencillos de localización subcelular e interacción en células vivas y constituye una potente herramienta para estudios posgenómicos de alto procesamiento en células de insecto.