Caracterización de una nueva mutante puntual de poliedrina en AcMNPV que genera poliedros anormales

LÓPEZ MARÍAA GABRIELA; ALFONSO VICTORIA; CARRILLO ELISA; TABOGA OSCAR

Huerta Grande, Córdoba

Jornada; XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

Sociedad Argentina de Virología

La proteína poliedrina de 29 kDa se expresa en altos niveles a tiempos tardíos de la infección de células con AcMNPV y es la proteína fundamental de los cuerpos de oclusión (poliedros) de los baculovirus. Se conoce que la formación de poliedros involucra la interacción entre poliedrina y otras proteínas presentes en la envoltura del virión. Sin embargo, la morfología de los poliedros depende no sólo de las interacciones entre poliedrina con otras proteínas virales y de la célula hospedadora, sino también de la secuencia aminoacídica de poliedrina. Se ha visto que cambios puntuales en la secuencia de aminoácidos de esta proteína altamente conservada dentro de los baculovirus puede conducir a la formación de mutantes de distinta morfología de poliedros. Con el objetivo de caracterizar una mutación en poliedrina hallada en un plásmido utilizado en el laboratorio, se construyó un baculovirus recombinante con la poliedrina mutada (AcPOLmut) por el método de bac-to-bac. Esta mutación consistió en el reemplazo de una A por una G en la posición 130 del gen poliedrina que produce un cambio del aminoácido 44 de glicina (E) a ácido glutámico (G). Con este baculovirus se infectaron células Sf9 para el estudio de la morfogénesis de los poliedros. A los tres días post infección se puedo observar en las células de 1 a 5 poliedros cúbicos de gran tamaño. La morfología aberrante de estos poliedros sugiere que la mutación en poliedrina altera el ensamblaje de estas estructuras cristalinas. Se han hallado mutaciones puntuales  en AcMNPV que generan enormes poliedros de forma cúbica en el núcleo de células infectadas que presentan poca a nula oclusión viral. Tanto la detección de la proteína VP39 por Western blot en el contenido de poliedros como cortes de células infectadas con el baculovirus AcPOLmut por microscopía electrónica demostraron que el mutante genera poca e ineficiente oclusión viral dentro de los poliedros descriptos. Sin embargo, estos poliedros mutantes fueron utilizados como inóculo oral de larvas de Rachiplusia nu, y la visualización de signos de infección en éstas confirmó la naturaleza infectiva de los poliedros anormales. En conclusión, la construcción de un baculovirus con una mutación puntual en poliedrina nunca antes descripta permitió definir que una sustitución puntual en el aminoácido 44 da lugar a la formación de poliedros anormalmente grandes que ocluyen baculovirus ineficientemente pero son capaces de infectar larvas de lepidóptero por vía oral.