Estudio de la función y localización de la proteína baculoviral Ac109

ALFONSO VICTORIA; RECA SOL RITA; MARONICHE GUILLERMO ANDRÉS; LÓPEZ MARÍA GABRIELA; CARRILLO ELISA; TABOGA OSCAR

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argenitina de Virología

Los baculovirus son patógenos de insectos utilizados en el control biológico de plagas y como vectores de expresión de proteínas heterólogas en cultivos de células de insecto y en larvas de lepidópteros. En su ciclo de infección presentan dos fenotipos: los virus derivados de los cuerpos de oclusión y los virus brotados, que poseen diferencias muy marcadas en su infectividad in vivo e in vitro. El análisis de los genomas de baculovirus hasta hoy secuenciados revela un grupo de 30 genes conservados, llamados core que poseerían papeles relevantes en el ciclo viral, relacionados con la replicación, la transcripción génica, el ensamblado de las nucleocápsides y la arquitectura del virión; también podrían estar involucrados en interacciones con el huésped, como la entrada a la célula blanco, la interferencia en el metabolismo celular y el establecimiento de la infección. Uno de los genes core en el nucleopoliedrovirus múltiple de Autographa californica (AcMNPV) es el Ac109. Aunque se sabe que este gen es esencial para la replicación viral in vitro se han publicado resultados contradictorios acerca de su función. En este marco, con el objetivo de aportar nuevas evidencias sobre el rol de la proteína Ac109 de AcMNPV en el ciclo de infección, se eliminó el gen en el genoma del virus por medio de la construcción de un bácmido knock out para Ac109 que expresa poliedrina y GFP. La transfección de células en cultivo con el bácmido en estudio y un genoma control confirmó la esencialidad del gen de interés; además, se puso en evidencia la factibilidad de complementar el gen en trans cuando se expresa bajo su propio promotor. Mediante la utilización de microscopía electrónica de transmisión se determinó que en ausencia de la proteína Ac109 en las células infectadas se producen poliedros en bajas cantidades que son incapaces de ocluir baculovirus, también se registró la presencia de viriones brotantes no infectivos en el sobrenadante de cultivo. Por otra parte, mediante la utilización de microscopía confocal se analizó la localización subcelular de la proteína fusionada a distintos fluorósforos y se realizaron ensayos para estudiar su cinética de expresión en el contexto de la infección. De este modo, fue posible determinar que a pesar de que su localización subcelular es citoplasmática cuando se expresa en forma aislada, en las células infectadas a medida que avanza el ciclo viral se dirige y se concentra en el núcleo en mayor medida que en citoplasma. Estos resultados sugieren que la entada de Ac109 al núcleo estaría determinada por algún factor viral tardío. En cuanto a la localización de esta proteína en las partículas virales, fue posible su inmunodetección en las nucleocápsides del fenotipo brotado y en los viriones derivados de los cuerpos de oclusión. En conclusión, el gen Ac109 de AcMNPV codifica una proteína estructural determinante para la infectividad de los viriones de fenotipo brotado. Por otra parte, Ac109 también estaría involucrada en el proceso de oclusión de los viriones en el núcleo que ocurre en etapas muy tardías de la infección.