Tipificación diferencial de las UDTs Tc III y Tc IV de Trypanosoma cruzi en base a las secuencias de la región intergénica del gen del miniexón.

CURA C; PÉNEAU J; ENRIQUEZ GF; OROZCO MM; CARDINAL MV; VALENCIA AYALA E; MÁLAGA MACHACA E; DA CRUZ MOREIRA O; ALBERTI A; DIOSQUE P; SANTALLA JA; GÜRTLER RE; AZNAR C; SCHIJMAN AG

Encuentro; XXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2012

Las poblaciones naturales de T. cruzi están compuestas por clones múltiples, distribuidos en 6 Unidades Discretas de Tipificación (UDTs TcI-TcVI). TcII/V/VI han sido vinculadas al ciclo doméstico de transmisión; TcIII/IV, al selvático; y TcI, a ambos. Nuestro equipo cuenta con un algoritmo de caracterización molecular que combina estrategias de PCR convencional basadas en regiones polimórficas del genoma de T. cruzi, entre las que se encuentra la región intergénica del miniexón (SL-IR). En ocasiones, este algoritmo no permite diferenciar entre TcIII y TcIV. El alineamiento de secuencias SL-IR de referencia nos permitió identificar mutaciones puntuales entre las UDTs, y diseñar una técnica de PCR multiplex en tiempo real con sondas Taqman (PCRTq). En este trabajo, comparamos los resultados obtenidos en la PCRTq y en la secuenciación directa de un fragmento de 200 pb dentro de la SL-IR en aislamientos TcIII/IV obtenidos a partir de muestras de animales y triatominos silvestres del Gran Chaco argentino, Brasil, Perú y Guyana Francesa, y de humanos infectados en la Amazonia de Bolivia. El análisis de las secuencias SL-IR nos permitió identificar 27 genotipos TcIII y 15 TcIV. Se observó total concordancia con los resultados de la PCRTq, excepto en los casos de infecciones mixtas TcI+TcIII ó TcI+TcIV, donde la reacción multiplex detectó la UDT mayoritaria o la que se detecta con mayor sensibilidad analítica (TcI>TcIII>TcIV). Sorprendentemente, tres aislados con genotipos TcIII, resultaron positivos en la PCRTq con sondas específicas de TcIII y de TcIV, no pudiendo descartar la presencia de una población parasitaria con diversos genotipos SL-IR o la de distintas copias de SL-IR en un mismo clon parasitario. Los resultados obtenidos demuestran la utilidad de la secuenciación directa de la SL-IR, asociada a los algoritmos de tipificación por PCR convencional o en tiempo real, en aquellos casos en que éstos no logren discriminar entre las UDTs TcIII y TcIV.