Parcial caracterización de asparagina sintetasa en Oenococcus oeni X2L aislado de vino.

NIETO PEÑALVER CARLOS; SAGUIR FABIANA M., Y MANCA DE NADRA MARÍA C.

Tucumán

Congreso; V° Congreso Nacional de jóvenes investigadores y I° Encuentro Nacional de Estudiantes de Posgrado; 2001

Asparagina es un aminoácido esencial para le crecimiento de la cepa X2L de Oenococcus oeni aislada de vino argentino. Su síntesis a partir de ácido L-aspártico, por la enzima asparagina sintetasa, le proporciona ventaja competitiva para su crecimiento en el nicho ecológico natural, vino, que desde le punto de vista nutricional es un medio pobre, principalmente en lo referido a compuestos nitrogenados. En este trabajo investigamos el efecto, sobre la actividad asparagina sintetasa, de diferentes condiciones de sustrato, iodoacetamida e iones bivalentes (Mg2+ y Mn2+) en forma individual y combinados. El microorganismo se cultiva en medio MRS adicionado de 15% de jugo de tomate, pH 4,8 a 30°C. Las células se cosechan en función de la fase de crecimiento, se lavan y resuspenden en buffer Tris-HCl pH 6,4. La actividad de la enzima se determina utilizando el método de Ravel, puesto a punto modificando la temperatura y tiempo de incubación a 30°C y 60 minutos respectivamente. Las proteínas totales se determinan aplicando el método de Bradford. La actividad específica de asparagina sintetasa es máxima, en la mitad de la fase exponencial (1,45 nmol/min/mg, con 100 mM de acido L-aspartico, en ausencia de cationes bivalentes). La adicion individual de 10 mM de Mg2+ o Mn2+ incrementa la actividad específica a 2,45 y 2,26 nmol/min/mg respectivamente. Cuando se adicionan los iones combinados la actividad es menor (2,04 nmol/min/mg). En presencia de 10 mM de Mg2+ el incremento de la concentración de sustrato, 25, 50, 75 y 100 mM aumenta la actividad de 0.87, 1,05, 1,68, a 2,45 nmol/min/mg respectivamente. En presencia de iodoacetamida 10 mM, la actividad enzimática es inhibida (30%). Los resultados de la parcial caracterización de asparagina sintetasa de Oenococcus oeni X2L, indican que la enzima se expresa con máxima actividad en la mitad de la fase exponencial de crecimiento, que los iones Mg2+ y Mn2+ actuan como efectores, activadores de la enzima y que los sulfhidrilos juegan un papel importante en su actividad.