Desarrollo de un medio de cultivo simplificado para Oenococcus oeni.

SAGUIR FABIANA, NIETO PEÑALVER CARLOS Y MANCA DE NADRA MARÍA C.

Buenos Aires

Congreso; 4ta. Feria y 2do. Congreso Latinoamericano en Biotecnologia BIOLATINA; 2000

Oenococcus oeni es utilizado como iniciador de la fermentación maloláctica en la industria vitivinícola. Requiere numerosos precursores metabólicos, especialmente aminoácidos y nucleótidos, además de vitaminas y minerales para su desarrollo. El objetivo de este estudio es obtener un medio mínimo que soporte el crecimiento de ambos microorganismos a elevada velocidad, evite exceso de nutrientes innecesarios y permita establecer caminos metabólicos relacionados a la síntesis de aminoácidos. Estudiamos comparativamente el crecimiento de las cepas de Oenococcus oeni m y X2L aisladas de vinos argentinos, respecto a sus requerimientos en medio MRS Jugo de Tomate 15% pH 4.8, con las siguientes modificaciones: -sin jugo de tomate; -sin jugo de tomate y peptona; -sin jugo de tomate, peptona y extracto de carne. En los medios privados de jugo de tomate se adiciona ácido pantoténico como factor de crecimiento. El desarrollo se determina espectrofotométricamente a 560 nm y cuantitativamente por el método de las diluciones sucesivas. La velocidad de crecimiento en medio basal es 0.45 y 0.44 h-1 y en medio MRS privado de jugo de tomate disminuye a 0.29 y 0.27 h-1 para Oenococcus oeni m y X2L respectivamente. Estos resultados indican el efecto estimulatorio del jugo de tomate. En estas condiciones, ambas cepas alcanzan una concentración celular, al final de la fase exponencial de crecimiento, similar a la observada en medio basal (3,2 x 109 ufc/ml para la cepa m y 1,6 x 109 ufc/ml para la cepa X2L). En medio MRS + jugo de tomate sin peptona, los parámetros de crecimiento, en ambas cepas, no se modifican. Al eliminar simultáneamente, jugo de tomate y peptona, la velocidad de crecimiento es inferior 24,1 y 25,9% para las cepas m y X2L respectivamente con respecto a los valores determinados en el medio privado de Jugo de Tomate. La biomasa final, si bien en mayor tiempo, es similar en ambos medios. En medio MRS privado de Jugo de Tomate, extracto de carne y peptona, se alteran los parámetros de crecimiento de ambas cepas. Oenococcus oeni m reduce su µ a 0,14 h-1, alcanzando una concentración celular al final de la fase exponencial de crecimiento de 5,9 x 107 ufc/ml, 2 ciclos logarítmicos inferior a lo determinado en el medio basal. Similares resultados se obtienen para la cepa X2L. Se determino en todos los medios, el efecto de la incorporación de los aminoácidos esenciales, acido L-aspartico, L-treonina y L-isoleucina, observandose solamente estimulacion de los parámetros en estudio, con la adicion combinada de acido L-aspartico y L-isoleucina. El medio MRS simplificado, privado de extracto de carne, peptona y jugo de tomate, adicionado de ácido pantoténico, soporta el crecimiento de ambas cepas de Oenococcus oeni. La formulación de este medio permite reducir las interferencias producidas por los compuestos orgánicos presentes en los medios complejos cuando se estudia el metabolismo de aminoácidos, incluyendo determinaciones de flujo de carbono.