Quorum quenching por levaduras rizosféricas tolerantes al Cu (II)

LEGUINA, ANA CAROLINA DEL V.; BERTINI, ELISA V.; PABLO M. FERNANDEZ; CASTELLANOS DE FIGUEROA, LUCÍA I.; CARLOS G. NIETO PEÑALVER

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2016

Los sistemas de Quorum Sensing (QS) son mecanismos de comunicación intercelular que les permiten a los microorganismos regular sufisiología mediante la liberación y detección de moléculas señal, las cuales se acumulan a medida que aumenta la densidad poblacional. Muchasbacterias Gram negativas utilizan como moléculas señal las acil‐homoserina lactonas (AHLs) en sus circuitos de QS. Algunos microorganismostienen la capacidad de interrumpir la comunicación célula a célula a través de mecanismos conocidos como Quorum Quenching (QQ). Lainterferencia en la comunicación bacteriana podría representar una alternativa para el biocontrol de fitopatógenos que utilizan sistemas de QSpara regular su patogenia. La actividad QQ ha sido ampliamente estudiada en bacterias y hongos filamentosos, sin embargo, no existe muchainformación de sistemas de QQ en levaduras. Es por esto que el objetivo del presente trabajo fue aislar e identificar levaduras rizosféricastolerantes al cobre a partir de plantas de tomate (Solanum lycopersicum) con capacidad de inactivar moléculas señal de QS bacteriano. El cobrees ampliamente empleado como fungicida en la producción hortícola.Plantas de tomate cultivadas en el Departamento de Lules (Tucumán) fueron utilizadas para los aislamientos de levaduras rizosféricas. Losmicroorganismos fueron inoculados en medios YM y PDA suplementados con tetraciclina y cloranfenicol. La tolerancia al cobre fue ensayada enYM suplementado con CuSO4. La identificación molecular se realizó mediante la secuenciación de la región ITS1‐5.8S‐ITS2 y del fragmentoD1/D2 del gen 26S ADNr utilizando el par de primers ITS1/NL4. Los asilamientos fueron separados analizándose su perfil de microsatélites conlos primers (GAC)5 y (GTG)5. La actividad quorum quenching fue ensayada en los aislamientos resistentes al cobre incubándolos en YMsuplementado con C6‐HSL y C10‐HSL. Las AHLs residuales se determinaron mediante bioensayos con Chromobacterium violaceum CV026 y C.violaceum Vir07.Se aislaron 48 levaduras rizosféricas, de las cuales se seleccionaron 14 por su mayor tolerancia al Cu (II) y por mostrar perfiles diferentes demicrosatélites. Estos aislamientos mostraron resistir concentraciones de hasta 10 mM de CuSO4 en medios agarizados. La identificación con losprimers ITS1‐NL4 mostró que todos pertenecen a la especie Cryptococcus laurentti. Nueve aislamientos se caracterizaron por mostrar actividadquorum quenching hacia por lo menos una de las AHLs ensayadas, mientras que los otros cinco no mostraron actividad QQ.Las levaduras rizosféricas que poseen sistemas de Quorum Quenching podrían alterar la intercomunicación de las bacterias que habitan larizósfera. A su vez, la tolerancia al Cu (II) de las cepas aisladas, permitirá realizar estudios sobre la influencia de este metal como contaminanteambiental en las interacciones entre bacterias y levaduras rizosféricas, y con el organismo hospedero, la planta de tomate.