Quitosano argentino para vehiculizar bioactivos de implicancia nutricional y biomédica

DE MATTEO R; DI SANTO MC; SANTAGAPITA P; POZNER R; ALAIMO A; PANTANO S; PEREZ OE

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Simposio; XIII Simposio Argentino de Polímeros - SAP 2019; 2019

CITEMA, Departamento de Fisica-FCEN-UBA,INTI, UTN, CIHIDECAR, INIFTA, ITPN, CIDCA, Insituto de Investigacion e Ingenieria Ambiental, UNSAM

El quitosano (CS) es un biopolímero compuesto de la unión demonómeros de N-glucosamina y N-Acetyl-glucosamina, através de uniones glucosídicas tipo β-1-4.Dadas sus múltiples características ha tenido una ampliainvestigación y desarrollo en los sucesivos años. Uno de losmotivos principales, se debe a su capacidad de exponer a pHsbajos ( PDGF AA > control). Por otro lado, el CS solo no modificó la migracion celular relativa de fibroblastos de la línea 3T3 cuando se adicionó en el medio de cultivo pero sí fue capaz de potenciar significativamente la migración inducida por PDGF migración celular relativa no se vió significativamente afectada al complementar PDGF-AA con quitosano cuales no se apreciaron señales del CS o se observa un incremento en ellas, respectivamente. Por otro lado, el cambio en el patrón de las bandas entre 1510-1440 y 1540 la zona de los estiramientos de los OH (3200 revelan las interacciones en el sistema mixto interacciones en el AF tanto a nivel del anillo de p del ácido p-amino-benzoico y del ácido glutámico. Mediante AFM y SEM se observó la topografía y la ultraestructura del sistema.Espectro de reflectancia por FTIR de quitosano y ácido fólico. Mediante ensayo de MTT se verificó el efecto protector antioxidante del resveratrol (RSV, 25 μM) frente a la injuria que produce el pigmento pro-oxidante A2E (Alaimo et al, 2019). A partir de microscopía de fluorescencia se observó el aumento de producción de ROS mitocondriales en células tratadas con A2E y la disminución de la producción en células incubadas previamente con RSV, verificando nuevamente su poder antioxidante. También se observó que el A2E incrementa la fragmentación de las redes mitocondriales y que el RSV previene este fenómeno. La fragmentación es un indicio del proceso apoptótico de las mitocondrias. Por otro lado, una vez verificado el efecto antioxidante del RSV objetivo fue proteger a este bioactivo de la degradación debido a que es altamente proclive a degradarse frente a diferentes estímulos, como la luz. Se observó para una concentración de CS 3 mg/ml, que las moléculas de RSV quedan entram una concentraciones entre 25 y 50 μM. Mediante espectrofotometría UV-Vis se evaluó la degradación del RSV expuesto a luz UV por una hora y media. Se diferentes concentraciones de RSV y RSV+ todos los casos el poder protector del CS exposición lumínica. Se generaron NPs de CS por gelificación iónica. La distribución del tamaño de partícula de las NPs y su potencial registraron mediante dispersión dinámica de la luz (DLS). En particular, para la combinación de CS (3 mg/ml) mg/ml) se obtuvo un pico de la población mayoritaria en 144 nm y un valor ζ = 21 ± 4 mV, lo que indica que la suspensión de NPs es relativamente estable. Por otro lado, el cambio 1440 y 1540-1548 cm-1 y la zona de los estiramientos de los OH (3200-3400 cm-1) el sistema mixto, mostrando interacciones en el AF tanto a nivel del anillo de pteridina como benzoico y del ácido glutámico. Mediante AFM y SEM se observó la topografía y la Espectro de reflectancia por FTIR de quitosano y verificó el efecto protector μM) frente a la injuria que oxidante A2E. A partir de microscopía de fluorescencia se observó el aumento de producción de ROS mitocondriales en células tratadas con A2E y la disminución de la producción en células incubadas previamente con RSV, verificando nuevamente su poder n se observó que el A2E incrementa la fragmentación de las redes mitocondriales y que el RSV previene este fenómeno. La fragmentación es un indicio del proceso apoptótico de las mitocondrias. Por otro lado, una vez verificado el efecto antioxidante del RSV en las células, el objetivo fue proteger a este bioactivo de la degradación debido a que es altamente proclive a degradarse frente a diferentes estímulos, como la luz. Se observó para una concentración de las moléculas de RSV quedan entrampadas a entre 25 y 50 μM. Mediante Vis se evaluó la degradación del RSV expuesto a luz UV por una hora y media. Se analizaron diferentes concentraciones de RSV y RSV+CS y se observó en CS sobre el RSV ante la por gelificación iónica. La distribución del tamaño de partícula de las NPs y su potencial ζ se registraron mediante dispersión dinámica de la luz (DLS). En (3 mg/ml) ? TPP (1.25 mg/ml) se obtuvo un pico de la población mayoritaria en 144 21 ± 4 mV, lo que indica que la suspensión de NPs es relativamente estable.La sonicación fue un método efectivo para obtener partículas de menor tamaño y cuya distribución resulte menos polidispersa. Se encontró un óptimo de tiempo de sonicado de 10 minutos. Las NPs obtenidas fueron caracterizadas por microscopía electrónica de transmisión (TEM). Las obtenidas denotan que las NPs presentan forma esférica y tamaño equivalente a los resultados obtenidos por DLS.Por su parte, mediante un sistema de ultrafiltración de las NPs con RSV incorporado, se determinó el porcentaje de eficiencia de encapsulación (EE) del bioactivo mediante espectrofotometría. El resultado obtenido arrojó una EE en el orden que la reportada en bibliografía.Conclusiones El uso de CS libre mejoró la acción del factor de crecimiento PDGF in vitro. La expectativa es que esta tendencia se replique en sistemas in vivo ya sea aumentando su eficiencia o el tiempo de vida media de esta proteína en los tejidos. Queda por determinar el mecanismo de acción por el cual estas dos moléculas interaccionan y mejoran la llegada o el efecto de PDGF al entrar en contacto con las células. La constante de unión (K) para el sistema binario AF más baja que la reportada en la bibliografía. Esto podría deberse al alto peso molecular del CS argentino fue posible determinar las zonas de grupos químicos vinculados a la interacción. La topografía y la morfología evaluadas por AFM y SEM muestran una estructura predominante de CS. Se considera a este CS argentino con alta potencialidad encapsular AF generando una matriz biocompatible para protegerlo y ejercer controlado de la vitamina a nivel intestinal. Con respecto a la matriz formada por CS-TPP, los resultados fueron auspiciosos en términos de la capacidad de carga de RSV y a la protección para el bioactivo. Por otro lado, las imágenes obtenidas por TEM mostraron NPs esférica. El tamaño estimado que se podía obtener a partir de esas imágenes fue consistente por lo obtenido mediante DLS