ROL DE LA VÍA LISOSOMAL EN LA MUERTE CELULAR INDUCIDA POR MANGANESO EN CÉLULAS DE GLIOMA C6

GOROJOD R.; ALAIMO A.; SAPIENZA CARLA; KOTLER M.L.

Hotel 13 de Julio, Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; SAIC-SAI; 2009

SAIC-SAI

El Manganeso (Mn) es un elemento esencial para el desarrollo y función del cerebro. La sobreexposición a este metal provoca su acumulación en la astroglia produciendo Manganismo, un síndrome con características similares al Parkinson. Dado que hemos demostrado que la apoptosis inducida por Mn involucra un aumento de ROS, nuestra hipótesis de trabajo propone que esta condición podría comprometer la integridad lisosomal. Empleando  células C6 de glioma de rata, se evaluó la toxicidad del  MnCl2 750µM a distintos tiempos. Empleando el ensayo de MTT, se detectó una disminución en la viabilidad de 6±2% (p<0.05) y 40±2% (p<0.001) para 6 y 24hs, respectivamente. En cambio, el ensayo con Neutral Red, un colorante vital que se acumula en lisosomas, mostró un aumento a las 6hs de incubación (45±4%, p<0.001) y una disminución (39±4%, p<0.001) a las 24hs con respecto al control. Por esta razón, se analizó la integridad de los lisosomas mediante microscopía de fluorescencia empleando naranja de acridina. Se observó un aumento a las 6hs en el número de células presentando fluorescencia roja, característica de la tinción lisosomal (144±28%, p<0.05). Los resultados obtenidos por tinción con monodansylcadaverina confirmaron la ausencia de procesos autofágicos. Tanto la preincubación con un inhibidor de la bomba de protones lisosomal (Bafilomicina A1 0,1nM) como con un inhibidor de Catepsina D (Pepstatina A 10µM) protegieron a las células de la toxicidad inducida por Mn (24hs), conduciendo a una recuperación de la viabilidad de 19±2% (p<0.05) y 40±2% (p<0.001) respectivamente, medida por ensayo de MTT y de 15±3% (p<0.05) determinada por Neutral Red para ambos inhibidores. Además, mediante análisis WB se demostró que ambos compuestos inhiben significativamente el clivaje de caspasa 8 inducido por Mn. Nuestros resultados sugieren un rol para la vía lisosomal en el daño celular inducido por Mn y señalan a la caspasa 8 como un participante central en la señalización de muerte.