Marcadores de Neurotoxicidad. Activación de la vía extrínseca en la muerte celular apoptótica inducida por MnCl2 en células de glioma C6

AGUSTINA ALAIMO; CARLA SAPIENZA; ROXANA GOROJOD; LLAUGER GABRIELA; KOTLER MONICA LIDIA

Ciudad de Mar del Plata, Pcia de Buenos Aires, Argentina

Congreso; II Congreso Argentino de la Sociedad de Toxicología y Química Ambiental (SETAC); 2008

Sociedad de Toxicología y Química Ambiental (SETAC)

El Manganeso (Mn) es un mineral presente en bajos niveles en la mayoría de las dietas. Es esencial para el organismo debido a su participación en procesos fisiológicos tales como el desarrollo y el funcionamiento del cerebro. El Mn es necesario para la actividad de varias enzimas, entre ellas, la superóxido dismutasa mitocondrial y la glutamina sintetasa. Otra vía de incorporación del Mn en el organismo es por inhalación. Exposiciones prolongadas a este metal pueden provocar efectos adversos en el sistema nervioso, dando lugar a un desorden neurológico con características clínicas semejantes a la enfermedad de Parkinson, denominado Manganismo. Esta patología ha sido descripta en individuos que trabajan en fábricas de manufacturación de Mn metálico, en minas y en aquellos que tienen contacto con plaguicidas que lo contengan, o gasolinas a las que se les agrega Mn para mejorar su rendimiento. Otro grupo de individuos con riesgo potencial son aquellos que ingieren agua corriente con altas concentraciones de Mn.  Se ha demostrado que la captación de Mn por parte de los astrocitos desempeña un rol crucial en el establecimiento del Manganismo. Por tal motivo se decidió estudiar las vías de señalización involucradas en la muerte celular inducida por MnCl2 en cultivos de células C6 de glioma de rata. La viabilidad celular se estudió por exclusión de Trypan Blue, reducción de MTT e incorporación de Neutral Red en las células. En los tres casos de observó un incremento dosis-dependiente en la muerte celular inducida por Mn2+. El análisis de la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) mediante espectrofluorometría indicó que el Mn2+ 750 μM produce un aumento de 17% y 77% en los niveles de ROS, en presencia y ausencia de suero, respectivamente. Mediante análisis Western Blot se observó que el Mn2+ 750 μM en ausencia de suero induce incremento en los niveles de proteína FAS-L (67%), en la forma clivada de caspasa 8 (135%) y en el sustrato de caspasa 3, PARP-1 clivado (77%).  La actividad de la caspasa 3 mostró un aumento de 127% y su participación en la vía de señalización se confirmó mediante el empleo del inhibidor específico AC-DEVD-CMK (10uM), que restituyó la viabilidad en un 90%. El presente trabajo sugiere que la vía extrínseca o de receptores de muerte estaría involucrada en la apoptosis inducida por Mn,  posiblemente a través de la participación del receptor  FAS /CD95. Palabras Claves:  apoptosis, astrocitos, manganeso, estrés oxidativo Códigos: Categoría Abierta (PCA), Biomarcadores (PB) Exposición: Poster