Implicancia de la vía extrínseca en la apoptosis inducida por manganeso en células de glioma C6

ALAIMO AGUSTINA; SAPIENZA CARLA; KOTLER MONICA

Huerta Grande, Cordoba, Argentina

Taller; Taller X Taller Argentino de Neurociencias.; 2008

Sociedad Argentina de Neurociencias (SAN)

El Manganeso (Mn) es un elemento esencial para el organismo debido a su participación en procesos fisiológicos tales como el desarrollo y el funcionamiento del cerebro. El Mn es necesario para la actividad de varias enzimas, entre ellas, la superóxido dismutasa mitocondrial y la glutamina sintetasa. Sin embargo, exposiciones prolongadas a este metal pueden provocar efectos adversos en el sistema nervioso, dando lugar a un desorden neurológico semejante a la enfermedad de Parkinson, denominado Manganismo. Se ha demostrado que la captación de Mn por parte de los astrocitos desempeña un rol crucial en el desencadenamiento de esta patología.   El objetivo de nuestro trabajo consistió en estudiar las vías de señales involucradas en la muerte celular inducida por  MnCl2 en cultivos de células C6 de glioma de rata.   La viabilidad celular se estudió mediante el empleo de tres técnicas (exclusión de Trypan Blue, reducción de MTT e incorporación de Neutral Red), las cuales analizan diferentes parámetros celulares. En los tres casos de observó un incremento dosis-dependiente en la muerte celular inducida por Mn2+. La producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) se determinó mediante espectrofluorometría empleando el reactivo 2´,7´-DCDH2F-DA, que en presencia de ROS es oxidado y convertido en 2´,7´-DCF. En condiciones de privación de suero, el Mn2+ (750 μM) produjo un aumento de 77% en la generación de ROS. En las mismas condiciones, empleando el colorante Hoechst 33258 y microscopía de fluorescencia, se visualizó un aumento en el número de células con morfología nuclear apoptótica (cromatina condensada y fragmentación nuclear). Mediante análisis Western Blot, se detectó un aumento en los niveles de proteína FAS-L (167%), en la forma clivada de caspasa 8 (235%) y en PARP-1 clivada (177%).  La actividad de la caspasa 3/7 mostró un aumento de 227%. En nuestro laboratorio se ha demostrado la participación de la vía intrínseca mitocondrial en la muerte apoptótica inducida por Mn2+ en astrocitos de rata. El  presente trabajo sugiere que la vía extrínseca o de receptores de muerte estaría también involucrada,  posiblemente a través de la participación del receptor  FAS /CD95