Modificación en los perfiles de expresión de proteínas reguladoras de la dinpamica mitocondrial en modelos celulares neuronas de esclerosis lateral amiotrófica familiar

ALAIMO A.; GOROJOD R.; UCHITEL O.D; KOTLER M.L.

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual de la SAIC, Reunión Científica Anual de la SAFIS y XLV Reunión Científica Anual de la SAFE; 2013

SAIC SAFE SAFIS

La  Esclerosis  Lateral  Amiotrófica  (ELA)  es  una  enfermedad neurodegenerativa con desenlace fatal que afecta a las motoneuronas. Se clasifica en esporádica y familiar y ambas formas comparten el curso clínico y los eventos patológicos. El 20% de los casos familiares son causados por mutaciones en el gen de la Cu/Zn SOD1. Las mitocondrias son organelas dinámicas y de morfología variable como resultado de un balance entre eventos de fusión y fisión, procesos regulados por un grupo de GTPasas, entre ellas Opa-1, Mfn-1/2 y Drp-1. Nuestro objetivo fue estudiar la morfología mitocondrial y el perfil de expresión de las proteínas que la modulan en dos modelos in vitro de ELA familiar. Se transfectaron células NSC-34 (motoneuronas de médula espinal hibridadas con células de neuroblastoma)y Neuro-2a (neuroblastoma) con la forma humana WT ó mutante G93A de SOD1. Los ensayos de viabilidad de MTT y Neutral Red determinaron que la mutante induce un 25 y 35% (p<0,05) de muerte en las NSC-34 y Neuro-2a respectivamente. Mediante tinción con el colorante fluorescente Mitotracker Red se observó que la G93A-SOD1 promueve alteraciones en la red de túbulos mitocondriales incrementando su fisión (NSC-34: 56% p<0,01; Neuro-2a: 32% p<0,05). Este fenómeno fue  acompañado  por  cambios  en  los  perfiles  de  expresión  de las proteínas de pro-fusión (Opa-1 y Mfn-2) y pro-fisión (Drp-1) medidos por Western Blot. Dado que ciertos factores ambientales pueden inducir estrés oxidativo (EO) y alterar la conformación y función de la SOD1, se indujo EO con H2O2(250μM, 90min) en las células transfectadas. Los parámetros descriptos anteriormente se vieron incrementados en las células portadoras de la G93ASOD1 tratadas con H2O2. Nuestros resultados sugieren que las proteínas moduladoras de la dinámica mitocondrial podrían ser posibles candidatas a biomarcadores en ELA, un avance en el  proceso de diagnóstico y seguimiento de la enfermedad que aún se encuentra pendiente.