Mecanismos inmunológicos involucrados en la respuesta de anticuerpos a gangliósidos utilizados como blanco en terapia antitumoral

ARANA E. I; VENIER, C; GUTHMANN, M; FAINBOIM, LEONARDO

Cordoba

Congreso; Congreso Anual Sociedad Argentina de Inmunología; 2013

Sociedad Argentina de Inmunología

El N-glicolil GM3 (NGcGM3) es un antígeno (Ag) tumoral, un gangliósido de expresión restringida a células cancerosas. Hay cantidades detectables de anticuerpos (Acs) aNGcGM3 en sueros humanos normales. Por la naturaleza química del Ag, nuestra hipótesis de trabajo es que el mecanismo inmunológico implicado en la generación in vivo de estos Acs naturales involucra la cooperación de linfocitos B (LB) y células iNKT, mediada por la presentación del Ag en un contexto CD1d. Utilizando un aIgG1 biotinilado, comprobamos la unión de una fusión recombinante CD1d-IgG1 a placas tratadas con Ag/MeOH o MeOH como control, revelando la biotina inmovilizada por un ensayo colorimétrico (p<0,05 en la diferencia de medias entre la DO de placas con Ag/MeOH y aquellas con MeOH, t-test no apareado). Extendimos esta observación a células que sobreexpresan NGcGM3 en superficie (X63). Al agregar CD1d-IgG1 al medio de cultivo, observamos su unión a la membrana de X63 mediante citometría de flujo, empleando un aIgG1-PE. Aplicando la misma técnica, pero con un Ac que reconoce el residuo N-Gc del Ag (14F7) detectamos, post cultivo en medio con NGcGM3, la unión del Ag a la superficie de linfoblastos transfectados con CD1d. En ambos casos, el desplazamiento de la MFI de toda la población resultó en más del doble en relación al control correspondiente (p<0,5). Repetimos el resultado con LB primarios. En todos los casos, la unión del isotipo IgG1 resultó inapreciable. Finalmente, mediante un modelo de co-cultivo con LB y NKT primarias humanas, detectamos por expresión de Ki 67, un aumento reproducible (triplicados) en la proliferación de ambas poblaciones celulares en presencia del Ag. Concluimos que en humanos, NGcGM3 es un ligando de CD1d. Más aún, los LB humanos pueden presentar NGcGM3 a células iNKT primarias. Como resultado de esta interacción, ambas poblaciones proliferan. No hay antecedentes en la literatura de este tipo de estudios con células primarias humanas con un ligando endógeno